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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 无水乙醇沉淀DNA
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解瑶123

银虫 (正式写手)

[求助] 无水乙醇沉淀DNA

用无水乙醇提取DNA有什么技巧？为什么我提了两次，都什么都没有？
我的方法：两倍体积的无水乙醇，加入DNA，-20°C两个小时，离心10分钟，10000转。吸弃上清，适当晾干，加入少量的水溶解。
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1楼 2012-11-14 08:41:35
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

weigh1111

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
解瑶123: 金币+1 2012-11-14 10:00:18
解瑶123: 金币+1 2012-11-14 10:01:37
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-11-14 16:34:12
这个样子看可能楼主你处理到这一步的时候就已经没有DNA了……因为无水乙醇这一步唯一可能出现问题的情况就是被DNA沉淀给吸走了……
楼主你如果抽的是基因组DNA的话，加入无水乙醇混匀之后，应该能看到有絮状的沉淀吧？如果没有，至少离心之后应该有沉淀
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4楼2012-11-14 09:41:51
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普通回帖

710002191

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
解瑶123: 金币+1 2012-11-14 10:01:49
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-11-14 16:33:46
解瑶123: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-11-30 20:44:31
我们一般是用试剂盒提取DNA还是从粪便里提，效果都还好了，乙醇的量应该是够了，-20摄氏度两个小时有必要吗，
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may
2楼2012-11-14 08:49:58
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meldoyren

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
解瑶123: 金币+1 2012-11-14 09:59:58
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-11-14 16:33:57
理论上这个操作时没有问题的，除非你的样品在预处理的时候就出现了问题，另外可以把转速设为12000g。每个转子的转速和离心力大小不一样的。
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3楼2012-11-14 09:00:25
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vivihao

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
解瑶123: 金币+2 2012-11-14 10:02:34
乙醇沉淀之前，有没有用醋酸钠呢》？
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5楼2012-11-14 09:45:25
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laybo
6楼2012-11-14 09:55:25
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解瑶123

银虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by meldoyren at 2012-11-14 09:00:25
理论上这个操作时没有问题的，除非你的样品在预处理的时候就出现了问题，另外可以把转速设为12000g。每个转子的转速和离心力大小不一样的。

样品在沉淀前肯定没问题，跑电泳看了，有。
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7楼2012-11-14 09:59:49
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解瑶123

银虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by weigh1111 at 2012-11-14 09:41:51
这个样子看可能楼主你处理到这一步的时候就已经没有DNA了……因为无水乙醇这一步唯一可能出现问题的情况就是被DNA沉淀给吸走了……
楼主你如果抽的是基因组DNA的话，加入无水乙醇混匀之后，应该能看到有絮状的沉淀 ...

应该是没沉淀完全
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8楼2012-11-14 10:01:13
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解瑶123

银虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by vivihao at 2012-11-14 09:45:25
乙醇沉淀之前，有没有用醋酸钠呢》？

我分析着可能是时间不够长，没用醋酸钠
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9楼2012-11-14 10:02:27
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sxxuan

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-11-14 16:34:26
解瑶123: 金币+1 2012-11-14 21:39:10
加醋酸钠，-20℃放置30min到1h就可以了，当然时间不适合的话放长一点时间不会有影响。离心12000rpm，15~30min，吸干上清的时候要注意有没有把沉淀吸走，然后用75%乙醇洗一到两次，再晾干，用TE溶解。
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你的日子如何，你的力量也必如何！
10楼2012-11-14 11:54:50
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