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解瑶123

银虫 (正式写手)

[求助] 无水乙醇沉淀DNA

用无水乙醇提取DNA有什么技巧?为什么我提了两次,都什么都没有?
我的方法:两倍体积的无水乙醇,加入DNA,-20°C两个小时,离心10分钟,10000转。吸弃上清,适当晾干,加入少量的水溶解。
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weigh1111

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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解瑶123: 金币+1 2012-11-14 10:00:18
解瑶123: 金币+1 2012-11-14 10:01:37
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-11-14 16:34:12
这个样子看可能楼主你处理到这一步的时候就已经没有DNA了……因为无水乙醇这一步唯一可能出现问题的情况就是被DNA沉淀给吸走了……
楼主你如果抽的是基因组DNA的话,加入无水乙醇混匀之后,应该能看到有絮状的沉淀吧?如果没有,至少离心之后应该有沉淀
4楼2012-11-14 09:41:51
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普通回帖

710002191

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
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解瑶123: 金币+1 2012-11-14 10:01:49
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-11-14 16:33:46
解瑶123: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-11-30 20:44:31
我们一般是用试剂盒提取DNA还是从粪便里提,效果都还好了,乙醇的量应该是够了,-20摄氏度两个小时有必要吗,
may
2楼2012-11-14 08:49:58
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meldoyren

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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解瑶123: 金币+1 2012-11-14 09:59:58
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-11-14 16:33:57
理论上这个操作时没有问题的,除非你的样品在预处理的时候就出现了问题,另外可以把转速设为12000g。每个转子的转速和离心力大小不一样的。
3楼2012-11-14 09:00:25
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vivihao

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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解瑶123: 金币+2 2012-11-14 10:02:34
乙醇沉淀之前,有没有用醋酸钠呢》?
5楼2012-11-14 09:45:25
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6楼2012-11-14 09:55:25
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解瑶123

银虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by meldoyren at 2012-11-14 09:00:25
理论上这个操作时没有问题的,除非你的样品在预处理的时候就出现了问题,另外可以把转速设为12000g。每个转子的转速和离心力大小不一样的。

样品在沉淀前肯定没问题,跑电泳看了,有。
7楼2012-11-14 09:59:49
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解瑶123

银虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by weigh1111 at 2012-11-14 09:41:51
这个样子看可能楼主你处理到这一步的时候就已经没有DNA了……因为无水乙醇这一步唯一可能出现问题的情况就是被DNA沉淀给吸走了……
楼主你如果抽的是基因组DNA的话,加入无水乙醇混匀之后,应该能看到有絮状的沉淀 ...

应该是没沉淀完全
8楼2012-11-14 10:01:13
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解瑶123

银虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by vivihao at 2012-11-14 09:45:25
乙醇沉淀之前,有没有用醋酸钠呢》?

我分析着可能是时间不够长,没用醋酸钠
9楼2012-11-14 10:02:27
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sxxuan

金虫 (著名写手)

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★ ★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-11-14 16:34:26
解瑶123: 金币+1 2012-11-14 21:39:10
加醋酸钠,-20℃放置30min到1h就可以了,当然时间不适合的话放长一点时间不会有影响。离心12000rpm,15~30min,吸干上清的时候要注意有没有把沉淀吸走,然后用75%乙醇洗一到两次,再晾干,用TE溶解。
你的日子如何,你的力量也必如何!
10楼2012-11-14 11:54:50
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