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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 急求！DNA如何具体纯化？
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yangyang1991

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 急求！DNA如何具体纯化？ 已有2人参与

我用的CTAB法，开始用量多，新鲜叶片5-6g，用50ml离心管，加15ml氯仿异戊醇进行抽提，重复了两遍。最后用异丙醇沉淀，无水乙醇，70%乙醇洗涤。用200ul 水溶解，感觉没容完，还有气泡。

现在感觉DNA含蛋白太多，260：280在1.8以下。想提纯。不知道如何具体操作？是把DNA溶解后，继续用15ml的氯仿异戊醇按原步骤重复抽提吗？还是其他的。。。。

急求！
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1楼 2014-07-17 08:23:22
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yangyang1991

铁杆木虫 (著名写手)
顶下～～

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2楼2014-07-17 09:01:22
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yangyang1991

铁杆木虫 (著名写手)
小白求助～

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3楼2014-07-17 09:45:52
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jingrong978

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yangyang1991: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-07-18 00:44:41
我的导师教我的做法是：
1.2-25倍100%的酒精冰箱中先预冷，降温后再加入DNA中；
2.低温，冰中反应5min至更长时间；
3.低温，离心；
4.加70%乙醇清洗两遍；
5.加TE溶解DNA.
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攻读海洋石油降解菌研究
4楼2014-07-17 14:32:12
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yangyang1991

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by jingrong978 at 2014-07-17 14:32:12
我的导师教我的做法是：
1.2-25倍100%的酒精冰箱中先预冷，降温后再加入DNA中；
2.低温，冰中反应5min至更长时间；
3.低温，离心；
4.加70%乙醇清洗两遍；
5.加TE溶解DNA.

谢谢。第一步是加入到之前提的DNA中（已经用水溶过）吧，然后在低温环境中浸洗、离心？
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5楼2014-07-17 17:35:53
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jingrong978

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by yangyang1991 at 2014-07-17 17:35:53
谢谢。第一步是加入到之前提的DNA中（已经用水溶过）吧，然后在低温环境中浸洗、离心？...

先把酒精降下温来再加入提取的DNA中，而且，我们都是用TE溶解DNA,水也是可以的！但是两者有多大差别，我不知道呢！

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攻读海洋石油降解菌研究
6楼2014-07-17 18:50:40
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yangyang1991

铁杆木虫 (著名写手)
嗯，谢谢！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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7楼2014-07-18 00:44:21
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匿名

用户注销 (著名写手)
感谢参与，应助指数 +1
本帖仅楼主可见
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8楼2014-07-18 01:38:46
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于翔潜底跃

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by jingrong978 at 2014-07-17 14:32:12
我的导师教我的做法是：
1.2-25倍100%的酒精冰箱中先预冷，降温后再加入DNA中；
2.低温，冰中反应5min至更长时间；
3.低温，离心；
4.加70%乙醇清洗两遍；
5.加TE溶解DNA.

这个方法能够除去蛋白吗？我提取的DNA跑PCR完全没有条带就连引物2聚体也没有但是阳性对照什么都不缺而且提取完DNA我都检测过了提出了DNA我怀疑是不是残存的一些物质抑制PCR求大神解释一下
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9楼2015-08-25 16:24:54
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