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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 求助 水样中总DNA 的提取！
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eagle_edu

金虫 (正式写手)

[求助] 求助 水样中总DNA 的提取！

目前，我用MoBio 强力土壤 DNA 提取试剂盒 PowerSoil™ DNA Isolation Kit 提取油田水样中的微生物总DNA，首先是用0.22的微孔滤膜过滤，然后剪碎加入到试剂盒中，按步骤提取，为什么总是提不出来？实验室室温10-14度，谢谢！
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1楼2013-01-07 00:08:10
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

cqlsf

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+3, good！ 2013-01-07 19:35:51
eagle_edu: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-01-08 09:33:47
建议：1看水样中其他杂质是否过多？是否需要初步沉淀除杂、去油污，去除提DNA的干扰？
    2、样品中微生物种群及数量初步估计，数量很多还是极其稀少？是真菌多还是细菌多？G+还是G-? 如果数量极少，需要浓缩富集，是滤膜过滤还是离心沉淀等？
   3、提取出来的DNA有时很稀少，常规电泳看不到，可通过PCR放大看看，紫外光度计看看，到底有没有？  
祝顺利！
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老顽虫是大酱油滴：知新，行知，业精于勤。。。木虫的闺蜜叫木马。。
2楼2013-01-07 09:20:09
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普通回帖

oldflying

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
水样提取DNA相对来说还是比较容易的，在2004年的Science上有一篇是做的海洋宏基因组的，对你应该有用，你可以去查一下：《Environmental Genome Shotgun sequencing of The Sargasso Sea》
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一个人的努力和坚持！
3楼2013-01-07 13:28:38
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kiruwa

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
eagle_edu: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-01-08 09:36:46
我以前用过和你类似方法,也提不出来,建议你可以采用MO BIO 提取水样的kit. 这个土壤kit似乎对水样没用.
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请注意,照片不是我本人!!!请不要把此人和我的长相联系到一起去.
4楼2013-01-07 14:02:59
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xj8442cn

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
eagle_edu: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-01-08 09:37:40
水样和缓冲液比例是多少？一般加大起始水量，同时减少水量在缓冲液的比例。测出来的量如果很少的话建议用2100检测
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5楼2013-01-07 15:35:42
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mizhoulong

木虫 (著名写手)

环境卫生、微生物学

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
eagle_edu: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-01-08 09:37:55
不会吧，我用国产天根的都没问题。当然不是给天根做广告。

估计就是水样中微生物浓度太低了，如果少于比如10E3，估计难于提取吧？
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环境卫生、微生物学、卫生应急
6楼2013-01-08 05:35:52
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eagle_edu

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cqlsf at 2013-01-07 09:20:09
建议：1看水样中其他杂质是否过多？是否需要初步沉淀除杂、去油污，去除提DNA的干扰？
    2、样品中微生物种群及数量初步估计，数量很多还是极其稀少？是真菌多还是细菌多？G+还是G-? 如果数量极少，需要浓缩富集 ...

是先用滤纸过滤，然后又用滤膜抽滤的，油污应该能除去吧，还有什么好的方法除油污啊？微生物的数量挺多的，能达到10E4。
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7楼2013-01-08 09:35:50
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eagle_edu

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by kiruwa at 2013-01-07 14:02:59
我以前用过和你类似方法,也提不出来,建议你可以采用MO BIO 提取水样的kit. 这个土壤kit似乎对水样没用.

水样的好贵啊
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8楼2013-01-08 09:37:12
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harben

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
eagle_edu: 金币+6, ★★★很有帮助, 1 2013-01-11 08:56:05
我也是做油田产出水的，经常是提不到可见条带，但是PCR能扩增出来，问题的关键还是在菌体收集上。
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9楼2013-01-09 08:33:45
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eagle_edu

金虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by harben at 2013-01-09 08:33:45
我也是做油田产出水的，经常是提不到可见条带，但是PCR能扩增出来，问题的关键还是在菌体收集上。

你都是怎样收集菌体啊
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10楼2013-01-11 08:55:52
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