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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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@无花棉@

银虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】水抽提法 DNA提取

从资料中看到下面一段话:
水抽提法:利用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液除去RNA,然后将沉淀溶于水中,使DNA充分溶解于水中,离心后收集上清液.在上清中加入固体氯化钠调节至2.6M.加入2倍体积95%乙醇,立即用搅拌法搅出.然后分别用66% ?80%和95%乙醇以及丙铜洗涤,最后在空气中干燥,既得DNA样品.此法提取的DNA中蛋白质含量较高,故一般不用.为除蛋白可将此法加以改良,在提取过程中加入SDS.
      请问哪位虫友用该方法提取过核酸,效果如何?上面的方法步骤是否完整?谢谢!!
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shaquila

金虫 (正式写手)



@无花棉@(金币+1): 2011-03-18 16:22:37
lstt09nk(金币+1): 鼓励交流 2011-03-19 12:52:40
这个方法的效率一定很低,而且杂质很多,没有除蛋白的步骤啊
2楼2011-03-18 16:15:16
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@无花棉@

银虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by shaquila at 2011-03-18 16:15:16:
这个方法的效率一定很低,而且杂质很多,没有除蛋白的步骤啊

你好,问一个弱弱的问题,加入SDS的话,是不是会和蛋白质形成复合物,离心的话会不会沉淀出来,这样可以理解成除蛋白步骤吗?
4楼2011-03-18 16:24:37
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shaquila

金虫 (正式写手)


@无花棉@(金币+1): 2011-03-18 21:20:07
@无花棉@(金币+5): O(∩_∩)O谢谢 2011-03-18 21:20:32
用SDS除蛋白,你在哪步加,然后通过沉淀去除??
5楼2011-03-18 19:12:36
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@无花棉@

银虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by shaquila at 2011-03-18 19:12:36:
用SDS除蛋白,你在哪步加,然后通过沉淀去除??

一开始就加吧,SDS的作用不是破坏细胞膜,解离核蛋白,还能与蛋白质结合成沉淀吗?资料中提到的那步离心,是不是就可以把这种复合体给沉淀出来,取上清液就可以了呢?
6楼2011-03-18 21:19:39
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shaquila

金虫 (正式写手)


★ ★
lstt09nk(金币+2): 感谢参与欢迎常来 2011-03-19 12:52:58
@无花棉@(金币+1): 谢谢! 2011-03-19 19:08:40
如果你是要用SDS沉淀蛋白,在DNA溶出后添加适量kcl,离心去蛋白效果更好~~
而后面nacl+乙醇沉淀步骤,加入的Nacl量似乎没有那么多,沉淀DNA只要10% 3M 醋酸钠即可,如果你前边加入了Kcl,后面的醋酸钠量可以再减少~~
后面的步骤可以参考DNA纯化的步骤,醋酸钠和乙醇加进去以后可以放到-20度 30分钟(一定要混匀)
我估计你这个文献是很早的文献,其实提DNA的方法都差不多,裂解,去蛋白,纯化,你可以先试试,不行在用CTAB法,这个效果很好

[ Last edited by shaquila on 2011-3-19 at 10:33 ]
7楼2011-03-19 10:29:29
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rioarsenal

金虫 (正式写手)



lstt09nk(金币+1): 感谢参与 2011-03-19 12:53:46
@无花棉@(金币+2): 谢谢 2011-03-19 19:08:25
建议楼主好好看《分子克隆实验指南》,里面关于DNA提取的方法非常好,不要乱找资料。
8楼2011-03-19 10:41:26
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@无花棉@

银虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by rioarsenal at 2011-03-19 10:41:26:
建议楼主好好看《分子克隆实验指南》,里面关于DNA提取的方法非常好,不要乱找资料。

谢谢你的建议!我不是学生物的,不是特别懂,只是想找提取率最大的方法。谢谢,我再好好看看。
9楼2011-03-19 19:08:12
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shaquila

金虫 (正式写手)


@无花棉@(金币+2): 2011-03-20 09:05:30
那楼主如果是初学,那就按经典法提吧
10楼2011-03-19 23:32:04
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@无花棉@

银虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by shaquila at 2011-03-19 23:32:04:
那楼主如果是初学,那就按经典法提吧

谢谢。CTAB法我查阅了很多资料,导师最后否认了这种方法,原因是觉得最终得率太低,要求最好用工业提取法。再次感谢!!
11楼2011-03-20 09:08:39
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wylee01

禁虫 (正式写手)

@无花棉@(金币+2): 请问有更简单的步骤吗? 2011-03-20 13:37:42
本帖内容被屏蔽

12楼2011-03-20 12:51:06
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wylee01

禁虫 (正式写手)

@无花棉@(金币+3): 谢谢!! 2011-03-20 17:00:13
本帖内容被屏蔽

13楼2011-03-20 14:59:29
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shaquila

金虫 (正式写手)


@无花棉@(金币+2): 谢谢!! 2011-03-20 18:45:19
lz,用CTAB的得率很高的,做southern的DNA我全部用这个提的,25毫升管提的,够做10次,而且纯度挺高的,如果蛋白要除得彻底可以用酚抽提,但是会损失10-30%的DNA
ls用的和CTAB差不多吧,酚氯仿加上异戊醇效果更好

[ Last edited by shaquila on 2011-3-20 at 17:59 ]
14楼2011-03-20 17:55:00
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@无花棉@

银虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by shaquila at 2011-03-20 17:55:00:
lz,用CTAB的得率很高的,做southern的DNA我全部用这个提的,25毫升管提的,够做10次,而且纯度挺高的,如果蛋白要除得彻底可以用酚抽提,但是会损失10-30%的DNA
ls用的和CTAB差不多吧,酚氯仿加上异戊醇效果更好 ...

非常感谢!我之前一直考虑用CTAB,方案写好后,导师就让我放弃该方法,说提出来的量太少了(因为提完之后是要上小鼠的)。我觉得只有尝试一下才能知道结果。既然你也提到得率很高,我觉得很有必要自己偷着试试。。。
15楼2011-03-20 18:48:34
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2011-03-18 16:16   回复  
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