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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】水抽提法 DNA提取
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@无花棉@

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】水抽提法 DNA提取

从资料中看到下面一段话：
水抽提法：利用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液除去RNA，然后将沉淀溶于水中，使DNA充分溶解于水中,离心后收集上清液.在上清中加入固体氯化钠调节至2.6M.加入2倍体积95%乙醇,立即用搅拌法搅出.然后分别用66% ?80%和95%乙醇以及丙铜洗涤,最后在空气中干燥,既得DNA样品.此法提取的DNA中蛋白质含量较高,故一般不用.为除蛋白可将此法加以改良,在提取过程中加入SDS.
      请问哪位虫友用该方法提取过核酸，效果如何？上面的方法步骤是否完整？谢谢！！
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1楼 2011-03-18 15:56:43
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@无花棉@

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by shaquila at 2011-03-18 19:12:36:
用SDS除蛋白，你在哪步加，然后通过沉淀去除？？

一开始就加吧，SDS的作用不是破坏细胞膜，解离核蛋白，还能与蛋白质结合成沉淀吗？资料中提到的那步离心，是不是就可以把这种复合体给沉淀出来，取上清液就可以了呢？
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6楼2011-03-18 21:19:39
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shaquila

金虫 (正式写手)
★
@无花棉@(金币+1): 2011-03-18 16:22:37
lstt09nk(金币+1): 鼓励交流 2011-03-19 12:52:40
这个方法的效率一定很低，而且杂质很多，没有除蛋白的步骤啊
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2楼2011-03-18 16:15:16
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@无花棉@

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by shaquila at 2011-03-18 16:15:16:
这个方法的效率一定很低，而且杂质很多，没有除蛋白的步骤啊

你好，问一个弱弱的问题，加入SDS的话，是不是会和蛋白质形成复合物，离心的话会不会沉淀出来，这样可以理解成除蛋白步骤吗？
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4楼2011-03-18 16:24:37
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shaquila

金虫 (正式写手)
@无花棉@(金币+1): 2011-03-18 21:20:07
@无花棉@(金币+5): O(∩_∩)O谢谢 2011-03-18 21:20:32
用SDS除蛋白，你在哪步加，然后通过沉淀去除？？
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5楼2011-03-18 19:12:36
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