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@无花棉@

银虫 (小有名气)

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[交流] 【求助/交流】水抽提法 DNA提取

从资料中看到下面一段话：
水抽提法：利用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液除去RNA，然后将沉淀溶于水中，使DNA充分溶解于水中,离心后收集上清液.在上清中加入固体氯化钠调节至2.6M.加入2倍体积95%乙醇,立即用搅拌法搅出.然后分别用66% ?80%和95%乙醇以及丙铜洗涤,最后在空气中干燥,既得DNA样品.此法提取的DNA中蛋白质含量较高,故一般不用.为除蛋白可将此法加以改良,在提取过程中加入SDS.
请问哪位虫友用该方法提取过核酸，效果如何？上面的方法步骤是否完整？谢谢！！

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1楼 2011-03-18 15:56:43

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shaquila

金虫 (正式写手)

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★ ★
lstt09nk(金币+2): 感谢参与欢迎常来 2011-03-19 12:52:58
@无花棉@(金币+1): 谢谢！ 2011-03-19 19:08:40

如果你是要用SDS沉淀蛋白，在DNA溶出后添加适量kcl，离心去蛋白效果更好～～
而后面nacl＋乙醇沉淀步骤，加入的Nacl量似乎没有那么多，沉淀DNA只要10% 3M 醋酸钠即可，如果你前边加入了Kcl，后面的醋酸钠量可以再减少～～
后面的步骤可以参考DNA纯化的步骤，醋酸钠和乙醇加进去以后可以放到－20度 30分钟（一定要混匀）
我估计你这个文献是很早的文献，其实提DNA的方法都差不多，裂解，去蛋白，纯化，你可以先试试，不行在用CTAB法，这个效果很好

[ Last edited by shaquila on 2011-3-19 at 10:33 ]