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eagle_edu

金虫 (正式写手)

[求助] 求助 水样中总DNA 的提取!

目前,我用MoBio 强力土壤 DNA 提取试剂盒 PowerSoil™ DNA Isolation Kit 提取油田水样中的微生物总DNA,首先是用0.22的微孔滤膜过滤,然后剪碎加入到试剂盒中,按步骤提取,为什么总是提不出来?实验室室温10-14度,谢谢!
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oldflying

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
水样提取DNA相对来说还是比较容易的,在2004年的Science上有一篇是做的海洋宏基因组的,对你应该有用,你可以去查一下:《Environmental Genome Shotgun sequencing of The Sargasso Sea》
一个人的努力和坚持!
3楼2013-01-07 13:28:38
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cqlsf

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+3, good! 2013-01-07 19:35:51
eagle_edu: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-01-08 09:33:47
建议:1看水样中其他杂质是否过多?是否需要初步沉淀除杂、去油污,去除提DNA的干扰?
    2、样品中微生物种群及数量初步估计,数量很多还是极其稀少?是真菌多还是细菌多?G+还是G-? 如果数量极少,需要浓缩富集,是滤膜过滤还是离心沉淀等?
   3、提取出来的DNA有时很稀少,常规电泳看不到,可通过PCR放大看看,紫外光度计看看,到底有没有?  
祝顺利!
老顽虫是大酱油滴:知新,行知,业精于勤。。。木虫的闺蜜叫木马。。
2楼2013-01-07 09:20:09
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kiruwa

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
eagle_edu: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-01-08 09:36:46
我以前用过和你类似方法,也提不出来,建议你可以采用MO BIO 提取水样的kit. 这个土壤kit似乎对水样没用.
请注意,照片不是我本人!!!请不要把此人和我的长相联系到一起去.
4楼2013-01-07 14:02:59
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xj8442cn

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
eagle_edu: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-01-08 09:37:40
水样和缓冲液比例是多少?一般加大起始水量,同时减少水量在缓冲液的比例。测出来的量如果很少的话建议用2100检测
5楼2013-01-07 15:35:42
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