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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 求各位大神帮忙看看我的DNA电泳图
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宝呗茗

新虫 (初入文坛)

[求助] 求各位大神帮忙看看我的DNA电泳图 已有9人参与

求各位大神帮小妹看看点样孔下面的那条带是什么东西？怎么去除？

我用的是CTAB法提取植物叶片的DNA，氯仿：异戊醇=24：1 抽提一次，无水乙醇沉淀一次，75%酒精洗两次，但是杂质还是很多，不知道点样孔下面的那个是什么杂质，用什么药品可以去除呢？
谢谢！

求各位大神帮忙看看我的DNA电泳图
DNA 582.jpg
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1楼 2015-02-01 22:35:57
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

张小小美丽

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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宝呗茗(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-02-05 22:01:44
看了楼主的图，有2点可以确定：
1.第7条泳道的那条特殊的条带才是DNA。
2.最下面的那一排是没有去除掉的已经降解的RNA。需要用RNA酶消化才能去除RNA。
至于点样孔里面的亮亮的东西，如果不是你跑胶人为造成的，应该就是残留的蛋白质，你才抽提一次，我们一般都抽提3次，才能基本保证去除蛋白质等大分子的杂质。另外建议你重新跑一下胶，如果还是这样的话，就说明应该是我说的这种情况。
祝你好运。
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fighting!!!
12楼2015-02-03 10:44:25
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普通回帖

wyzl2007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-02-02 10:15:56
点样孔下你所谓的杂带就是你想要的DNA

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2015-02-01 22:37:32
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宝呗茗

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wyzl2007 at 2015-02-01 22:37:32
点样孔下你所谓的杂带就是你想要的DNA

那请问第七个孔的那条带是什么啊？
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3楼2015-02-01 22:39:03
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still2008

至尊木虫 (著名写手)

破碎世界的守护者

【答案】应助回帖

★
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-02-02 10:16:05
上样量多少，电压多少，跑了多久？看图片好像楼上说的有点道理

[ 发自小木虫客户端 ]
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有时一本正经，有时胡言乱语。
4楼2015-02-01 22:46:04
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LeeDB

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-02-02 10:16:14
是不是跑的时间不够，感觉maker没跑开啊
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5楼2015-02-01 23:13:17
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宝呗茗

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by still2008 at 2015-02-01 22:46:04
上样量多少，电压多少，跑了多久？看图片好像楼上说的有点道理

上样4ul，电压100V，跑30min
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6楼2015-02-01 23:22:54
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宝呗茗

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by LeeDB at 2015-02-01 23:13:17
是不是跑的时间不够，感觉maker没跑开啊

跑了半个小时
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7楼2015-02-01 23:24:04
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李强1

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-02-02 10:16:21
孔上是蛋白质没有清除干净，你抽提至少2次，尽量不要吸到中间蛋白层。另外你也没有maker呀

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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独自等待
8楼2015-02-01 23:36:37
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浅语8905

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
感觉就是没跑开呀，跑的时间短了，还有怎么没看到maker呢
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9楼2015-02-02 12:38:30
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
宝呗茗(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-02-05 22:01:59
看marker就知道结果怎样了，marker条带不清楚且量很少。时间，电压都是没问题的。
最下面的一条亮带我认为不是你的目的条带，你的目的片段大小是多少？虽然marker很模糊，但是还是能判断大小的，可以知道亮带是否是非特异性产物。还有胶浓度，好像marker没有完全跑开，胶浓度和分子量是有关系的，分子量越大，胶浓度就越小。
如果真是没有目的片段跑出来的话，就要考虑一下几个方面：模板的提取（纯度），引物的合理性，PCR热启动酶的性能，以及扩增的时间温度循环数
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
10楼2015-02-02 13:20:58
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