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宝呗茗

新虫 (初入文坛)

[求助] 求各位大神帮忙看看我的DNA电泳图 已有9人参与

求各位大神帮小妹看看点样孔下面的那条带是什么东西?怎么去除?

我用的是CTAB法提取植物叶片的DNA,氯仿:异戊醇=24:1 抽提一次,无水乙醇沉淀一次,75%酒精洗两次,但是杂质还是很多,不知道点样孔下面的那个是什么杂质,用什么药品可以去除呢?
谢谢!

求各位大神帮忙看看我的DNA电泳图
DNA 582.jpg
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张小小美丽

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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宝呗茗(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-02-05 22:01:44
看了楼主的图,有2点可以确定:
1.第7条泳道的那条特殊的条带才是DNA。
2.最下面的那一排是没有去除掉的已经降解的RNA。需要用RNA酶消化才能去除RNA。
至于点样孔里面的亮亮的东西,如果不是你跑胶人为造成的,应该就是残留的蛋白质,你才抽提一次,我们一般都抽提3次,才能基本保证去除蛋白质等大分子的杂质。另外建议你重新跑一下胶,如果还是这样的话,就说明应该是我说的这种情况。
祝你好运。
fighting!!!
12楼2015-02-03 10:44:25
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普通回帖

wyzl2007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2015-02-02 10:15:56
点样孔下你所谓的杂带就是你想要的DNA

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2015-02-01 22:37:32
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宝呗茗

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wyzl2007 at 2015-02-01 22:37:32
点样孔下你所谓的杂带就是你想要的DNA

那请问第七个孔的那条带是什么啊?
3楼2015-02-01 22:39:03
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still2008

至尊木虫 (著名写手)

破碎世界的守护者

【答案】应助回帖


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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2015-02-02 10:16:05
上样量多少,电压多少,跑了多久?看图片好像楼上说的有点道理

[ 发自小木虫客户端 ]
有时一本正经,有时胡言乱语。
4楼2015-02-01 22:46:04
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LeeDB

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2015-02-02 10:16:14
是不是跑的时间不够,感觉maker没跑开啊
5楼2015-02-01 23:13:17
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宝呗茗

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by still2008 at 2015-02-01 22:46:04
上样量多少,电压多少,跑了多久?看图片好像楼上说的有点道理

上样4ul,电压100V,跑30min
6楼2015-02-01 23:22:54
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宝呗茗

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by LeeDB at 2015-02-01 23:13:17
是不是跑的时间不够,感觉maker没跑开啊

跑了半个小时
7楼2015-02-01 23:24:04
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李强1

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2015-02-02 10:16:21
孔上是蛋白质没有清除干净,你抽提至少2次,尽量不要吸到中间蛋白层。另外你也没有maker呀

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
独自等待
8楼2015-02-01 23:36:37
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浅语8905

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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感觉就是没跑开呀,跑的时间短了,还有怎么没看到maker呢
9楼2015-02-02 12:38:30
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

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★ ★
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宝呗茗(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-02-05 22:01:59
看marker就知道结果怎样了,marker条带不清楚且量很少。时间,电压都是没问题的。
最下面的一条亮带我认为不是你的目的条带,你的目的片段大小是多少?虽然marker很模糊,但是还是能判断大小的,可以知道亮带是否是非特异性产物。还有胶浓度,好像marker没有完全跑开,胶浓度和分子量是有关系的,分子量越大,胶浓度就越小。
如果真是没有目的片段跑出来的话,就要考虑一下几个方面:模板的提取(纯度),引物的合理性,PCR热启动酶的性能,以及扩增的时间温度循环数
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
10楼2015-02-02 13:20:58
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