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CTAB法提取真菌DNA，得到白色乳胶状透明沉淀，TE不溶。。。。 已有1人参与
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最近在用ＣＴＡＢ法提取真菌的ＤＮＡ，方法步骤如下： 1. 取适量菌丝，加入液氮研磨成粉末状，加入600 μL CTAB抽提液中，65℃温浴1 h。 2. 在抽提液中加入650 μL氯仿-异戊醇（24﹕1），混匀后离心取上清 3. 同法再抽提1遍。 4. 在上清中加入1 mL CTAB 沉淀液，室温沉淀30 min，12 000 r/min 离心4 min，倒上清。（这一步看到沉淀，透明乳胶状。） 5. 将沉淀溶于 400 μL高盐 TE，37℃30 min溶解。（这步３０ｍｉｎ时，沉淀并未溶解。第一次做，并没有经验，所以接着进行了下一步） 6. 加入两倍体积-20℃无水乙醇在-20℃沉淀2 h，12 000 r/min 离心5 min，风干后加入80 μLTE。（这步加入ＴＥ后沉淀同样没溶解） CTAB抽提液: 200ml 2% CTAB，100 mM Tris-HCl （pH 8.0），20 mMEDTA，pH 8.0，1.4 M NaCl，2% β-巯基乙醇 CTAB 沉淀液:100ml 1% CTAB，50 mMTris-HCl（pH 8.0），10 mM EDTA 高盐 TE 100mL 10 mM Tris-HCl（pH 8.0），0.1 mM EDTA，1 M NaCl 不知道那沉淀到底是什么东西，是ＤＮＡ吗？不是的话那又是什么？以上步骤哪部出了问题？还请各位多帮忙，拜谢。 |
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lvbobo823
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2楼2014-01-09 17:09:28
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