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love_糖糖

金虫 (正式写手)

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[求助] CTAB法提取真菌DNA，得到白色乳胶状透明沉淀，TE不溶。。。。已有1人参与

最近在用ＣＴＡＢ法提取真菌的ＤＮＡ，方法步骤如下：
1. 取适量菌丝，加入液氮研磨成粉末状，加入600 μL CTAB抽提液中，65℃温浴1 h。
2. 在抽提液中加入650 μL氯仿-异戊醇（24﹕1），混匀后离心取上清
3. 同法再抽提1遍。
4. 在上清中加入1 mL CTAB 沉淀液，室温沉淀30 min，12 000 r/min 离心4 min，倒上清。（这一步看到沉淀，透明乳胶状。）
5. 将沉淀溶于 400 μL高盐 TE，37℃30 min溶解。（这步３０ｍｉｎ时，沉淀并未溶解。第一次做，并没有经验，所以接着进行了下一步）
6. 加入两倍体积-20℃无水乙醇在-20℃沉淀2 h，12 000 r/min 离心5 min，风干后加入80 μLTE。（这步加入ＴＥ后沉淀同样没溶解）

CTAB抽提液: 200ml
2% CTAB，100 mM Tris-HCl （pH 8.0），20 mMEDTA，pH 8.0，1.4 M NaCl，2% β-巯基乙醇
CTAB 沉淀液:100ml
1% CTAB，50 mMTris-HCl（pH 8.0），10 mM EDTA
高盐 TE 100mL
10 mM Tris-HCl（pH 8.0），0.1 mM EDTA，1 M NaCl
不知道那沉淀到底是什么东西，是ＤＮＡ吗？不是的话那又是什么？以上步骤哪部出了问题？还请各位多帮忙，拜谢。

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CTAB提取液保存了一段时间，有白色漂浮物，可以用来直接提取真菌DNA吗？已经有3人回复

1楼 2014-01-09 16:06:11

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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
love_糖糖: 金币+2, ★有帮助 2014-01-13 22:20:31

在提植物DNA时也出现这种情况，一般是些蛋白。

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