| 查看: 2164 | 回复: 1 | ||
[求助]
CTAB法提取真菌DNA，得到白色乳胶状透明沉淀，TE不溶。。。。 已有1人参与
|
|
最近在用ＣＴＡＢ法提取真菌的ＤＮＡ，方法步骤如下： 1. 取适量菌丝，加入液氮研磨成粉末状，加入600 μL CTAB抽提液中，65℃温浴1 h。 2. 在抽提液中加入650 μL氯仿-异戊醇（24﹕1），混匀后离心取上清 3. 同法再抽提1遍。 4. 在上清中加入1 mL CTAB 沉淀液，室温沉淀30 min，12 000 r/min 离心4 min，倒上清。（这一步看到沉淀，透明乳胶状。） 5. 将沉淀溶于 400 μL高盐 TE，37℃30 min溶解。（这步３０ｍｉｎ时，沉淀并未溶解。第一次做，并没有经验，所以接着进行了下一步） 6. 加入两倍体积-20℃无水乙醇在-20℃沉淀2 h，12 000 r/min 离心5 min，风干后加入80 μLTE。（这步加入ＴＥ后沉淀同样没溶解） CTAB抽提液: 200ml 2% CTAB，100 mM Tris-HCl （pH 8.0），20 mMEDTA，pH 8.0，1.4 M NaCl，2% β-巯基乙醇 CTAB 沉淀液:100ml 1% CTAB，50 mMTris-HCl（pH 8.0），10 mM EDTA 高盐 TE 100mL 10 mM Tris-HCl（pH 8.0），0.1 mM EDTA，1 M NaCl 不知道那沉淀到底是什么东西，是ＤＮＡ吗？不是的话那又是什么？以上步骤哪部出了问题？还请各位多帮忙，拜谢。 |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有107人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- CTAB法提取真菌DNA的求助
已经有4人回复
- CTAB提取液保存了一段时间，有白色漂浮物，可以用来直接提取真菌DNA吗？
已经有3人回复
lvbobo823
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 363 (硕士)
- 金币: 7753.3
- 散金: 15
- 红花: 9
- 帖子: 751
- 在线: 189.4小时
- 虫号: 819723
- 注册: 2009-07-31
- 性别: GG
- 专业: 植物遗传学
2楼2014-01-09 17:09:28