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CTAB法提取真菌DNA,得到白色乳胶状透明沉淀,TE不溶。。。。 已有1人参与
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最近在用CTAB法提取真菌的DNA,方法步骤如下: 1. 取适量菌丝,加入液氮研磨成粉末状,加入600 μL CTAB抽提液中,65℃温浴1 h。 2. 在抽提液中加入650 μL氯仿-异戊醇(24﹕1),混匀后离心取上清 3. 同法再抽提1遍。 4. 在上清中加入1 mL CTAB 沉淀液,室温沉淀30 min,12 000 r/min 离心4 min,倒上清。(这一步看到沉淀,透明乳胶状。) 5. 将沉淀溶于 400 μL高盐 TE,37℃30 min溶解。(这步30min时,沉淀并未溶解。第一次做,并没有经验,所以接着进行了下一步) 6. 加入两倍体积-20℃无水乙醇在-20℃沉淀2 h,12 000 r/min 离心5 min,风干后加入80 μLTE。(这步加入TE后沉淀同样没溶解) CTAB抽提液: 200ml 2% CTAB,100 mM Tris-HCl (pH 8.0),20 mMEDTA,pH 8.0,1.4 M NaCl,2% β-巯基乙醇 CTAB 沉淀液:100ml 1% CTAB,50 mMTris-HCl(pH 8.0),10 mM EDTA 高盐 TE 100mL 10 mM Tris-HCl(pH 8.0),0.1 mM EDTA,1 M NaCl 不知道那沉淀到底是什么东西,是DNA吗?不是的话那又是什么?以上步骤哪部出了问题?还请各位多帮忙,拜谢。 |
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lvbobo823
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2楼2014-01-09 17:09:28












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