| 查看: 2204 | 回复: 1 | ||
[求助]
CTAB法提取真菌DNA,得到白色乳胶状透明沉淀,TE不溶。。。。 已有1人参与
|
|
最近在用CTAB法提取真菌的DNA,方法步骤如下: 1. 取适量菌丝,加入液氮研磨成粉末状,加入600 μL CTAB抽提液中,65℃温浴1 h。 2. 在抽提液中加入650 μL氯仿-异戊醇(24﹕1),混匀后离心取上清 3. 同法再抽提1遍。 4. 在上清中加入1 mL CTAB 沉淀液,室温沉淀30 min,12 000 r/min 离心4 min,倒上清。(这一步看到沉淀,透明乳胶状。) 5. 将沉淀溶于 400 μL高盐 TE,37℃30 min溶解。(这步30min时,沉淀并未溶解。第一次做,并没有经验,所以接着进行了下一步) 6. 加入两倍体积-20℃无水乙醇在-20℃沉淀2 h,12 000 r/min 离心5 min,风干后加入80 μLTE。(这步加入TE后沉淀同样没溶解) CTAB抽提液: 200ml 2% CTAB,100 mM Tris-HCl (pH 8.0),20 mMEDTA,pH 8.0,1.4 M NaCl,2% β-巯基乙醇 CTAB 沉淀液:100ml 1% CTAB,50 mMTris-HCl(pH 8.0),10 mM EDTA 高盐 TE 100mL 10 mM Tris-HCl(pH 8.0),0.1 mM EDTA,1 M NaCl 不知道那沉淀到底是什么东西,是DNA吗?不是的话那又是什么?以上步骤哪部出了问题?还请各位多帮忙,拜谢。 |
» 猜你喜欢
SEL120-34A HCl:CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
氢氧化钾活化操作
已经有19人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有181人回复
散金
已经有68人回复
生物质超级电容器
已经有0人回复
ALK5 高选择性小分子 LY-3200882:可放大合成路线与质控要点解析
已经有0人回复
AM630(CAS 164178-33-0):CB2 选择性配体的实验使用与供应要点
已经有0人回复
ADC标杆分子T-DM1全解析:从结构设计到实验室应用的技术要点
已经有0人回复
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做?
已经有0人回复
His标签蛋白纯化怎么才能快?
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:
CTAB法提取真菌DNA的求助
已经有4人回复
CTAB提取液保存了一段时间,有白色漂浮物,可以用来直接提取真菌DNA吗?
已经有3人回复
lvbobo823
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 363 (硕士)
- 金币: 7753.3
- 散金: 15
- 红花: 9
- 帖子: 751
- 在线: 189.4小时
- 虫号: 819723
- 注册: 2009-07-31
- 性别: GG
- 专业: 植物遗传学

2楼2014-01-09 17:09:28









回复此楼