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DNA降解问题（求解释原因） 已有2人参与
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从sigma买的Deoxyribonucleic acid, low molecular weight from salmon sperm（脱氧核糖核酸，来自三文鱼的精子）。这东西放在4度冰箱两年了，现在发现用水溶DNA呈酸性，pH=4.这是不是说明，这样品降解了。那么降解后的DNA，A260/A280的值会怎么变化呢？最近实验老是不能重复，被老板骂，所以希望各位兄弟姐妹，踊跃发言，金币绝对不会少的。 |
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luwei13566
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一般做杂交的封闭液是需要把鱼精DNA给预处理的。直接拿DNA这东西做营养源我还真没做过，不清楚是否需要预处理。不过我感觉如果DNA做营养物的话，对鱼精DNA质量要求不高。 1.一般细胞拿DNA做营养物需要在体外将其降解为碱基、脱氧核糖、磷酸才能被细胞摄取入体内。你添加的DNA再完整作为营养物也必然会被外源核酸酶、磷脂酶给降解掉才能被吸收，这个过程中大量磷酸释放出来，pH肯定是要下降的，因此有必要的话需要加入缓冲液维持培养基的pH。 2.你买的这个DNA是low molecular weight DNA，可能已经预处理过了。pH 4左右可能就是其正常的pH值，直接用Tris buffer溶解就可以用了，整个培养基可以用Tris buffer 调一下pH试试看 |
人于两点
7楼2015-06-09 14:48:10
luwei13566
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是以干粉的形式保存在冰箱里，中途也没拆开过吗？ 1.我感觉应该能用，溶在水中测得的pH也不一定是DNA降解导致的，因为本身样品中的成分本身就很杂，还有相当量的蛋白，按照说明书上写的，只要用50 mM Tris pH 8.0溶解了，A260/280在1.4左右应该就能用。 2.这个东西后期还得超声处理吧，后期还得抽提、煮沸一类的。你要是不放心处理完可以跑个电泳检测一下。只要DNA出现带型应该就没啥问题。 3.用这个做封闭吗？本身杂交就得多做几次，特别是前期还有预处理，可能对你的结果影响更直接。 |
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