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人于两点

铜虫 (小有名气)

[求助] DNA降解问题(求解释原因) 已有2人参与

从sigma买的Deoxyribonucleic acid, low molecular weight from salmon sperm(脱氧核糖核酸,来自三文鱼的精子)。这东西放在4度冰箱两年了,现在发现用水溶DNA呈酸性,pH=4.这是不是说明,这样品降解了。那么降解后的DNA,A260/A280的值会怎么变化呢?最近实验老是不能重复,被老板骂,所以希望各位兄弟姐妹,踊跃发言,金币绝对不会少的。
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人于两点

铜虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by luwei13566 at 2015-06-08 23:59:05
是以干粉的形式保存在冰箱里,中途也没拆开过吗?
1.我感觉应该能用,溶在水中测得的pH也不一定是DNA降解导致的,因为本身样品中的成分本身就很杂,还有相当量的蛋白,按照说明书上写的,只要用50 mM Tris pH 8.0溶 ...

谢谢!我看到你的建议2了,你的意思是说买来的DNA干粉还要超声处理,后期还得抽提、煮沸一类的吗?还是直接用缓冲液溶解直接用啊?!
5楼2015-06-09 12:04:47
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
人于两点: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-06-09 10:26:57
是以干粉的形式保存在冰箱里,中途也没拆开过吗?
1.我感觉应该能用,溶在水中测得的pH也不一定是DNA降解导致的,因为本身样品中的成分本身就很杂,还有相当量的蛋白,按照说明书上写的,只要用50 mM Tris pH 8.0溶解了,A260/280在1.4左右应该就能用。
2.这个东西后期还得超声处理吧,后期还得抽提、煮沸一类的。你要是不放心处理完可以跑个电泳检测一下。只要DNA出现带型应该就没啥问题。
3.用这个做封闭吗?本身杂交就得多做几次,特别是前期还有预处理,可能对你的结果影响更直接。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

大家相互帮助哈
2楼2015-06-08 23:59:05
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人于两点

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by luwei13566 at 2015-06-08 23:59:05
是以干粉的形式保存在冰箱里,中途也没拆开过吗?
1.我感觉应该能用,溶在水中测得的pH也不一定是DNA降解导致的,因为本身样品中的成分本身就很杂,还有相当量的蛋白,按照说明书上写的,只要用50 mM Tris pH 8.0溶 ...

不是,我是用DNA作为P源来养菌,可是这DNA加入培养基溶解过后,培养基变成酸性了,菌都死了!
3楼2015-06-09 10:25:07
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TNX6

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
人于两点: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-06-09 12:06:15
干粉一般用的时候再溶,长期不用的放在低温保存,所以在溶完之后,最好分装一下。短期用的放4度木有问题,其他的扔低温保存。
你这放4度都两年了,能用的可能性不大(我也是做DNA方面的,放4度两周,我基本就不用了)。如果可以的话,直接换新的吧。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

奋斗的科研哈士奇
4楼2015-06-09 10:49:00
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