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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 条带拖尾问题
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nxyangbei

新虫 (初入文坛)

[求助] 条带拖尾问题 已有3人参与

求大神帮助！！分子量：110Kda,分离胶7.5%，浓缩胶4%。80V跑浓缩胶，120V跑分离胶。上样量48ug。抗体是ABcam单克隆一抗。为什么条带如此拖尾？

条带拖尾问题
IMG_2868.JPG
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1楼 2015-05-19 21:46:05
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倩女

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不知道你的浓缩胶有多高，还有你的上样量有多少微升。建议将浓缩胶适当的高一些，最好是等到样品能够压缩成为一条直线后进入分离胶。
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2楼2015-05-20 05:58:18
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nxyangbei

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 倩女 at 2015-05-20 05:58:18
不知道你的浓缩胶有多高，还有你的上样量有多少微升。建议将浓缩胶适当的高一些，最好是等到样品能够压缩成为一条直线后进入分离胶。

上的5ul。浓缩胶大概有2cm多~唉
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3楼2015-05-20 09:01:50
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你好像在丁香园上也发了这个问题吧
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早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！
4楼2015-05-20 10:42:00
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十七--十七

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
上样量是48ug，还是5ul？要是48的话，大了一倍，要是5的话，你用的微量进样器的量程是？
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5楼2015-05-20 10:59:06
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nxyangbei

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 十七--十七 at 2015-05-20 10:59:06
上样量是48ug，还是5ul？要是48的话，大了一倍，要是5的话，你用的微量进样器的量程是？

因为我用的是15孔梳，上样的微升数不能太大。所以就上了5微升，但蛋白量是48ug。用的0.5-10ul枪
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6楼2015-05-20 15:39:21
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nxyangbei

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 恶魔的左眼 at 2015-05-20 10:42:00
你好像在丁香园上也发了这个问题吧

恩恩。太着急了
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7楼2015-05-20 15:48:38
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十七--十七

银虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by nxyangbei at 2015-05-20 15:39:21
因为我用的是15孔梳，上样的微升数不能太大。所以就上了5微升，但蛋白量是48ug。用的0.5-10ul枪...

蛋白浓度是48ug/ul，蛋白量为240ug；还是5ul的量为48？要是前者，建议降低浓度三到四倍。
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8楼2015-05-20 19:51:02
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nxyangbei

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 十七--十七 at 2015-05-20 19:51:02
蛋白浓度是48ug/ul，蛋白量为240ug；还是5ul的量为48？要是前者，建议降低浓度三到四倍。...

恩恩，是5ul的量是48ug
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9楼2015-05-21 08:48:55
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十七--十七

银虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by nxyangbei at 2015-05-21 08:48:55
恩恩，是5ul的量是48ug...

多次试验
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10楼2015-05-21 10:02:56
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