24小时热门版块排行榜    

查看: 2889  |  回复: 7

waiting6830

铜虫 (小有名气)

[求助] 为什么PAGE电泳银染后条带较宽且拖尾 已有2人参与

样品为sigma的酶,开始时用10%和12%分离胶,marker条带跑不全,所以换成15%分离胶。用考马斯亮蓝染色,样品颜色较浅,所以用银染,买的银染试剂盒。具体条件如下:
分离胶15%
浓缩胶3%
上样量10微升
分离胶110mV
浓缩胶70mV
电泳结果如图,左右条带为marker,中间为样品,从左到右浓度依次降低。现在问题是:
1、条带宽,还拖尾,marker倾斜,为什么?调整分离胶浓度会不会好些?怎么做条带才好看?
2、考马斯亮蓝染色时样品只有一个条带出现,对应在marker第四个条带下方,而银染后出现很多条带,且对应marker第三个条带颜色与第四个同样深,为什么?是不是因为这个酶本来就不纯,含有一些浓度较低的蛋白杂质?还是因为上样时,样品被marker污染了?还是酶蛋白降解了?

为什么PAGE电泳银染后条带较宽且拖尾
IMG_20150410_174320_BURST1.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

waiting6830

铜虫 (小有名气)

写错了,电压单位是V
2楼2015-04-21 10:57:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

刘堃

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
waiting6830: 金币+8, 有帮助, 谢谢! 2015-04-27 10:34:48
感觉可能和电泳是产热有关,导致marker出现热扩散现象,尤其是marker上样在胶的两侧。
3楼2015-04-23 13:20:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

刘堃

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

对了,跑胶之前有没有透析啊
4楼2015-04-23 13:23:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bao可雅

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

.如果之前跑的蛋白条带正常,
有可能有两个原因:
1.可能是你的银染之前没有洗脱的时候,没有震荡或者洗的不彻底,
2.银染时间控制不好。太长了,
也就是说试剂盒的操作中是不是符合说明书的规范
5楼2015-04-24 11:03:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

waiting6830

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 刘堃 at 2015-04-23 13:23:27
对了,跑胶之前有没有透析啊

样品要透析吗?我用的样品是sigma的纯酶啊
6楼2015-04-27 10:31:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

waiting6830

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 刘堃 at 2015-04-23 13:20:12
感觉可能和电泳是产热有关,导致marker出现热扩散现象,尤其是marker上样在胶的两侧。

如果是这样,那怎么办呢?放冷库里跑?
7楼2015-04-27 10:32:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

刘堃

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by waiting6830 at 2015-04-27 10:31:42
样品要透析吗?我用的样品是sigma的纯酶啊...

如果有盐就要透析,以前见老外他们跑胶的时候,用一种低温循环搞过,想不起来叫什么了,冷酷也们达到这样效果,不妨试试

[ 发自小木虫客户端 ]
8楼2015-04-27 12:27:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 waiting6830 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 北科281学硕材料求调剂 +14 tcxiaoxx 2026-03-20 16/800 2026-03-25 23:14 by peike
[考研] 考研调剂 +6 来好运来来来 2026-03-21 7/350 2026-03-25 22:43 by 418490947
[考研] 08工学调剂 +13 用户573181 2026-03-20 18/900 2026-03-25 22:00 by zbssa
[考研] 299求调剂 +7 某某某某位 2026-03-21 8/400 2026-03-25 20:34 by 热情沙漠
[考研] 生物技术与工程 +3 1294608413 2026-03-25 4/200 2026-03-25 18:02 by 1294608413
[考研] 085602 289分求调剂 +7 WWW西西弗斯 2026-03-24 7/350 2026-03-25 14:28 by 3Strings
[考研] 081700 调剂 267分 +10 迷人的哈哈 2026-03-23 10/500 2026-03-25 12:12 by userper
[考研] 289求调剂 +9 怀瑾握瑜l 2026-03-20 9/450 2026-03-25 11:02 by userper
[考研] 340求调剂 +5 话梅糖111 2026-03-24 5/250 2026-03-25 06:53 by ilovexiaobin
[考研] 调剂 +4 13853210211 2026-03-24 4/200 2026-03-24 19:44 by ms629
[考研] 070300化学求调剂 +9 苑豆豆 2026-03-20 9/450 2026-03-24 17:15 by licg0208
[考研] 291求调剂 +3 HanBeiNingZC 2026-03-24 3/150 2026-03-24 16:34 by barlinike
[考研] 一志愿211 初试270分 求调剂 +5 谷雨上岸 2026-03-23 6/300 2026-03-24 16:32 by laoshidan
[基金申请] 请教下大家 2026年国家基金申请是双盲审吗? +3 lishucheng1 2026-03-22 5/250 2026-03-24 08:22 by gltch
[考研] 335求调剂 +4 yuyu宇 2026-03-23 5/250 2026-03-23 23:49 by Txy@872106
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境,总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-23 8/400 2026-03-23 20:36 by Creta
[考研] 一志愿中南化学(0703)总分337求调剂 +9 niko- 2026-03-19 10/500 2026-03-22 16:08 by ColorlessPI
[考研] 一志愿北京化工大学070300 学硕336求调剂 +5 vv迷 2026-03-21 8/400 2026-03-22 14:20 by ColorlessPI
[考研] 0703化学调剂 +4 妮妮ninicgb 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:39 by 学员8dgXkO
[考研] 290求调剂 +7 ^O^乜 2026-03-19 7/350 2026-03-20 21:43 by JourneyLucky
信息提示
请填处理意见