24小时热门版块排行榜    

查看: 3075  |  回复: 7

waiting6830

铜虫 (小有名气)

[求助] 为什么PAGE电泳银染后条带较宽且拖尾 已有2人参与

样品为sigma的酶,开始时用10%和12%分离胶,marker条带跑不全,所以换成15%分离胶。用考马斯亮蓝染色,样品颜色较浅,所以用银染,买的银染试剂盒。具体条件如下:
分离胶15%
浓缩胶3%
上样量10微升
分离胶110mV
浓缩胶70mV
电泳结果如图,左右条带为marker,中间为样品,从左到右浓度依次降低。现在问题是:
1、条带宽,还拖尾,marker倾斜,为什么?调整分离胶浓度会不会好些?怎么做条带才好看?
2、考马斯亮蓝染色时样品只有一个条带出现,对应在marker第四个条带下方,而银染后出现很多条带,且对应marker第三个条带颜色与第四个同样深,为什么?是不是因为这个酶本来就不纯,含有一些浓度较低的蛋白杂质?还是因为上样时,样品被marker污染了?还是酶蛋白降解了?

为什么PAGE电泳银染后条带较宽且拖尾
IMG_20150410_174320_BURST1.jpg
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

waiting6830

铜虫 (小有名气)

写错了,电压单位是V
2楼2015-04-21 10:57:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

刘堃

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
waiting6830: 金币+8, 有帮助, 谢谢! 2015-04-27 10:34:48
感觉可能和电泳是产热有关,导致marker出现热扩散现象,尤其是marker上样在胶的两侧。
3楼2015-04-23 13:20:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

刘堃

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

对了,跑胶之前有没有透析啊
4楼2015-04-23 13:23:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bao可雅

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

.如果之前跑的蛋白条带正常,
有可能有两个原因:
1.可能是你的银染之前没有洗脱的时候,没有震荡或者洗的不彻底,
2.银染时间控制不好。太长了,
也就是说试剂盒的操作中是不是符合说明书的规范
5楼2015-04-24 11:03:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

waiting6830

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 刘堃 at 2015-04-23 13:23:27
对了,跑胶之前有没有透析啊

样品要透析吗?我用的样品是sigma的纯酶啊
6楼2015-04-27 10:31:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

waiting6830

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 刘堃 at 2015-04-23 13:20:12
感觉可能和电泳是产热有关,导致marker出现热扩散现象,尤其是marker上样在胶的两侧。

如果是这样,那怎么办呢?放冷库里跑?
7楼2015-04-27 10:32:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

刘堃

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by waiting6830 at 2015-04-27 10:31:42
样品要透析吗?我用的样品是sigma的纯酶啊...

如果有盐就要透析,以前见老外他们跑胶的时候,用一种低温循环搞过,想不起来叫什么了,冷酷也们达到这样效果,不妨试试

[ 发自小木虫客户端 ]
8楼2015-04-27 12:27:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 waiting6830 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 3/150 2026-08-29 18:26 by 4FFAWE8HcgUD
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +5 德尚中行 2026-08-27 6/300 2026-08-29 18:10 by manplx
[博后之家] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 4/200 2026-08-29 18:04 by 4FFAWE8HcgUD
[基金申请] 面上意见出来了 +6 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 12/600 2026-08-29 17:20 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +4 tannykie 2026-08-29 4/200 2026-08-29 17:14 by lmz0216
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 10/500 2026-08-29 16:49 by zICmwzsBXjbN
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +5 gdd2018 2026-08-28 10/500 2026-08-29 14:10 by Jacob678
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 9/450 2026-08-29 14:03 by jCd0dEvKHShX
[考研] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-29 11:40 by jCd0dEvKHShX
[找工作] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-29 11:29 by jCd0dEvKHShX
[教师之家] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 7/350 2026-08-29 09:26 by G6APbkg8SA6w
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 国合现在查不到了吗? +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 明天应该可查了!? +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
信息提示
请填处理意见