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waiting6830

铜虫 (小有名气)

[求助] 为什么PAGE电泳银染后条带较宽且拖尾 已有2人参与

样品为sigma的酶,开始时用10%和12%分离胶,marker条带跑不全,所以换成15%分离胶。用考马斯亮蓝染色,样品颜色较浅,所以用银染,买的银染试剂盒。具体条件如下:
分离胶15%
浓缩胶3%
上样量10微升
分离胶110mV
浓缩胶70mV
电泳结果如图,左右条带为marker,中间为样品,从左到右浓度依次降低。现在问题是:
1、条带宽,还拖尾,marker倾斜,为什么?调整分离胶浓度会不会好些?怎么做条带才好看?
2、考马斯亮蓝染色时样品只有一个条带出现,对应在marker第四个条带下方,而银染后出现很多条带,且对应marker第三个条带颜色与第四个同样深,为什么?是不是因为这个酶本来就不纯,含有一些浓度较低的蛋白杂质?还是因为上样时,样品被marker污染了?还是酶蛋白降解了?

为什么PAGE电泳银染后条带较宽且拖尾
IMG_20150410_174320_BURST1.jpg
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waiting6830

铜虫 (小有名气)

写错了,电压单位是V
2楼2015-04-21 10:57:45
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刘堃

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
waiting6830: 金币+8, 有帮助, 谢谢! 2015-04-27 10:34:48
感觉可能和电泳是产热有关,导致marker出现热扩散现象,尤其是marker上样在胶的两侧。
3楼2015-04-23 13:20:12
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刘堃

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

对了,跑胶之前有没有透析啊
4楼2015-04-23 13:23:27
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bao可雅

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

.如果之前跑的蛋白条带正常,
有可能有两个原因:
1.可能是你的银染之前没有洗脱的时候,没有震荡或者洗的不彻底,
2.银染时间控制不好。太长了,
也就是说试剂盒的操作中是不是符合说明书的规范
5楼2015-04-24 11:03:16
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waiting6830

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 刘堃 at 2015-04-23 13:23:27
对了,跑胶之前有没有透析啊

样品要透析吗?我用的样品是sigma的纯酶啊
6楼2015-04-27 10:31:42
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waiting6830

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 刘堃 at 2015-04-23 13:20:12
感觉可能和电泳是产热有关,导致marker出现热扩散现象,尤其是marker上样在胶的两侧。

如果是这样,那怎么办呢?放冷库里跑?
7楼2015-04-27 10:32:33
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刘堃

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by waiting6830 at 2015-04-27 10:31:42
样品要透析吗?我用的样品是sigma的纯酶啊...

如果有盐就要透析,以前见老外他们跑胶的时候,用一种低温循环搞过,想不起来叫什么了,冷酷也们达到这样效果,不妨试试

[ 发自小木虫客户端 ]
8楼2015-04-27 12:27:55
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