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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 保护性碱基带酶切位点 是不是？
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杨仔儿

木虫 (著名写手)

[求助] 保护性碱基带酶切位点 是不是？ 已有7人参与

引物上加了保护性碱基之后，目的基因上还用加酶切位点吗？

对我有帮助的回答10个BB，谢谢
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1楼 2015-05-15 14:48:31
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flh6078

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
杨仔儿: 金币+10, ★★★很有帮助, 说的很明白，受教了 2015-05-16 12:03:18
由于直接暴露在末端的酶切位点不容易直接被限制性核酸内切酶切开，因此在设计PCR引物时，人为的在酶切位点序列的5‘端外侧添加额外的碱基序列，即保护碱基，用来提高将来酶切时的活性 。所以设计引物时先加酶切位点，再加保护碱基。酶切位点保护碱基对应表百度就有，下一个就行。还有，楼主应先了解实验原理再开始实验~

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4楼2015-05-16 10:50:24
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
杨仔儿: 金币+10, ★有帮助 2015-05-16 10:28:25
有些不明白你的问题。引物在5’端加保护碱基的目的是因为克隆目的基因时引入酶切位点后避免位点在末端切割效率降低。如果你克隆目的基因时不加酶切位点，要保护碱基何用？
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2楼2015-05-16 04:33:19
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杨仔儿

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2015-05-16 04:33:19
有些不明白你的问题。引物在5’端加保护碱基的目的是因为克隆目的基因时引入酶切位点后避免位点在末端切割效率降低。如果你克隆目的基因时不加酶切位点，要保护碱基何用？

我的意思是保护性碱基和酶切位点是不是在一起

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3楼2015-05-16 10:28:13
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杨仔儿

木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by flh6078 at 2015-05-16 10:50:24
由于直接暴露在末端的酶切位点不容易直接被限制性核酸内切酶切开，因此在设计PCR引物时，人为的在酶切位点序列的5‘端外侧添加额外的碱基序列，即保护碱基，用来提高将来酶切时的活性 。所以设计引物时先加酶切位点 ...

关键是不知道怎么开始，所以我现在就是做到哪里学到哪里

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5楼2015-05-16 12:02:51
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