24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 1620  |  回复: 3

jhlong

新虫 (初入文坛)

[求助] 向各位大神请教:想合成一段60bp左右的碱基作为插入序列,如何设计酶切位点 已有3人参与

我想合成一段60bp左右的碱基序列作为插入序列,要在两端插入两个不一样的酶切位点,请问是通过合成出具有酶切位点保护碱基的序列后在进行酶切消化还是在合成的时候就直接合成出具有对应粘性末端的碱基序列然后直接插入,免去酶切的步骤?如果是第二种方法得到的含有粘性末端的序列在序列复性时会不会不稳定?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-03-24 18:47:20
如果除了酶切位点有要求,其余序列没要求的话,可以试着看看你实验室其他质粒有没有符合这2个酶切位点的可以切下来用。
如果没有或者其余序列有要求,那么还是合成出具有酶切位点保护碱基的序列后在进行酶切回收吧。我个人觉得直接合成出具有对应粘性末端的碱基序列有点不靠谱,因为酶切位点的碱基你没加保护碱基,万一合成的时候漏掉或者多了,你就只能重合,虽然不贵,但时间真的很重要啊,还影响心情。
2楼2014-03-24 16:38:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rv1nm2y

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-03-24 18:50:33
直接设计酶切位点吧,根据你所使用的表达载体选取限制性内切酶。
注意在你60bp里面不能有你所选取的内切酶的序列,要不然就切乱套了。
基本上就是   保护碱基-内切酶-引物,引物10-20bp左右,注意添加的保护碱基-内切酶-引物不要自我配对,或者配对不那么严重,要不然不容易扩增出来。

之后再切,连接酶连接过夜。
3楼2014-03-24 16:47:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-03-24 18:50:57
设计好酶切位点,设计好序列,直接合成两条序列退后就能产生粘性末端的那种,不要设计什么保护碱基,那样的话,你得酶切,这么短的序列不好回收
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2014-03-24 18:48:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 jhlong 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085404 293求调剂 +8 勇远库爱314 2026-04-08 8/400 2026-04-11 12:08 by zhq0425
[考研] 295求调剂 +3 桂秋二十八 2026-04-05 5/250 2026-04-11 11:36 by zhq0425
[考研] 295分求调剂 +9 ?要上岸? 2026-04-10 9/450 2026-04-11 10:48 by qingpingzhu
[考研] 300分求调剂 (085501机械专硕,本科扬大) +8 xu@841019 2026-04-11 8/400 2026-04-11 10:46 by qingpingzhu
[考研] 生物学调剂 可调剂到生物与医药 +8 李政莹 2026-04-06 9/450 2026-04-11 10:36 by wwj2530616
[考研] 283求调剂,工科! +12 苏打水7777 2026-04-08 12/600 2026-04-11 10:28 by 逆水乘风
[考研] 一志愿西北工业大学289 085602 +31 yang婷 2026-04-10 32/1600 2026-04-11 10:13 by only周
[考研] 广东省 085601 329分求调剂 +14 Eddieddd 2026-04-10 14/700 2026-04-11 09:58 by bljnqdcc
[考研] 复试调剂 +9 积极向上; 2026-04-10 11/550 2026-04-11 09:25 by 猪会飞
[考研] 362求调剂 +10 我要考大 2026-04-06 14/700 2026-04-10 17:00 by luoyongfeng
[考研] 285求调剂 +9 AZMK 2026-04-07 11/550 2026-04-10 15:24 by AZMK
[考研] 考研二轮调剂 +8 故人?? 2026-04-09 8/400 2026-04-10 09:44 by 青梅duoduo
[考研] 08工学 309分求调剂 +6 Yin DY 2026-04-08 6/300 2026-04-10 09:18 by Delta2012
[考研] 327求调剂 +12 Xxjc1107. 2026-04-06 12/600 2026-04-08 16:46 by luoyongfeng
[考研] 388求调剂 +6 四川王涛 2026-04-07 8/400 2026-04-08 00:17 by JourneyLucky
[考研] 316求调剂 +4 15318418673 2026-04-07 4/200 2026-04-07 22:12 by hemengdong
[考研] 307求调剂 +3 Youth@@ 2026-04-07 3/150 2026-04-07 22:00 by hemengdong
[考研] 292求调剂 +4 lilllllxccc 2026-04-05 5/250 2026-04-07 09:29 by 纺大杨老师
[考研] 工科 22408 267求推荐 +4 wanwan00 2026-04-05 5/250 2026-04-06 22:47 by chenzhimin
[考研] 求调剂到0856材料工程 +3 程9915 2026-04-05 3/150 2026-04-05 18:15 by 蓝云思雨
信息提示
请填处理意见