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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 保护性碱基带酶切位点 是不是？
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杨仔儿

木虫 (著名写手)

[求助] 保护性碱基带酶切位点 是不是？ 已有7人参与

引物上加了保护性碱基之后，目的基因上还用加酶切位点吗？

对我有帮助的回答10个BB，谢谢
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1楼 2015-05-15 14:48:31
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
杨仔儿: 金币+10, ★有帮助 2015-05-16 10:28:25
有些不明白你的问题。引物在5’端加保护碱基的目的是因为克隆目的基因时引入酶切位点后避免位点在末端切割效率降低。如果你克隆目的基因时不加酶切位点，要保护碱基何用？
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2楼2015-05-16 04:33:19
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flh6078

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
杨仔儿: 金币+10, ★★★很有帮助, 说的很明白，受教了 2015-05-16 12:03:18
由于直接暴露在末端的酶切位点不容易直接被限制性核酸内切酶切开，因此在设计PCR引物时，人为的在酶切位点序列的5‘端外侧添加额外的碱基序列，即保护碱基，用来提高将来酶切时的活性 。所以设计引物时先加酶切位点，再加保护碱基。酶切位点保护碱基对应表百度就有，下一个就行。还有，楼主应先了解实验原理再开始实验~

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4楼2015-05-16 10:50:24
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flh6078

金虫 (小有名气)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-05-18 23:10:13
引用回帖:
5楼: Originally posted by 杨仔儿 at 2015-05-16 12:02:51
关键是不知道怎么开始，所以我现在就是做到哪里学到哪里
...

http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=8937735
这里有我上传的一个分子实验手册，里面也有这方面的内容，你可以看看，希望对你有帮助
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8楼2015-05-16 18:44:50
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普通回帖

杨仔儿

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2015-05-16 04:33:19
有些不明白你的问题。引物在5’端加保护碱基的目的是因为克隆目的基因时引入酶切位点后避免位点在末端切割效率降低。如果你克隆目的基因时不加酶切位点，要保护碱基何用？

我的意思是保护性碱基和酶切位点是不是在一起

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3楼2015-05-16 10:28:13
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杨仔儿

木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by flh6078 at 2015-05-16 10:50:24
由于直接暴露在末端的酶切位点不容易直接被限制性核酸内切酶切开，因此在设计PCR引物时，人为的在酶切位点序列的5‘端外侧添加额外的碱基序列，即保护碱基，用来提高将来酶切时的活性 。所以设计引物时先加酶切位点 ...

关键是不知道怎么开始，所以我现在就是做到哪里学到哪里

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5楼2015-05-16 12:02:51
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小蚂蚁虫

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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杨仔儿: 金币+5 2015-05-16 14:50:44
当然要加酶切位点 不然你加保护碱基又有什么用
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6楼2015-05-16 14:35:13
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杨仔儿

木虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 小蚂蚁虫 at 2015-05-16 14:35:13
当然要加酶切位点 不然你加保护碱基又有什么用

我知道了，谢谢你

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7楼2015-05-16 14:50:37
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a13515517892

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-05-18 23:10:40
这两句话有什么关联，最重要的是看你想要怎么做你的实验，如果你只是扩增一条基因看看是否有你需要的条带，加不加位点对你有影响吗？如果你是要克隆一个基因，你不加位点怎么做到目的载体
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9楼2015-05-18 14:55:59
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王冠傑

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

http://wenku.baidu.com/link?url= ... 6Zb7OjLIHFhzU4wa9wS
保护碱基表，你一看就明白了。希望对你有帮助。
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10楼2015-05-18 15:24:48
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