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western蛋白比预期小 已有4人参与
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| 急求助！临近毕业，需要蛋白的western图，我做的是酵母展示，目的蛋白通过锚定蛋白锚定到细胞壁上，在目的蛋白下游加了flag标签，目的蛋白和锚定蛋白构成的融合蛋白的理论大小是130多kD。细胞样品SDS煮过后，跑western blot，蛋白条带大小只有70多kD。求助求助！不知道怎么解释这个现象，希望大家帮帮忙。仅有5个金币~ |
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恶魔的左眼
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【答案】应助回帖
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你用的是哪家抗体？Abcam的？ 做WB时，有时候会出现的条带跟所期待的条带不一致的，原因可能是: Western blotting is a technique that separates proteins based on size - in general, the smaller the protein the faster it migrates through the gel. However, migration is also affected by other factors and so the actual band size observed may differ from that predicted. Common factors include... • post-translational modification - e.g. phosphorylation, glycosylation etc which increases the size of the protein • post-translation cleavage - e.g. many proteins are synthesized as pro-proteins, and then cleaved to give the active form, e.g. pro-caspases • splice variants - alternative splicing may create different sized proteins from the same gene • relative charge - the composition of amino acids (charged vs non-charged) • multimers - e.g. dimerisation of a protein. This is usually prevented in reducing conditions, although strong interactions can result in the appearance of higher bands |
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shaoxin816
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