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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 【求助】western blot 跑胶，蛋白跑到一半模糊一片是怎么回事？
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飘飘零

铁虫 (初入文坛)

[求助] 【求助】western blot 跑胶，蛋白跑到一半模糊一片是怎么回事？ 已有4人参与

如图，刚开始十几分钟还好好的，差不多到分离胶就开始模糊一片，求指点

【求助】western blot 跑胶，蛋白跑到一半模糊一片是怎么回事？
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【求助】western blot 跑胶，蛋白跑到一半模糊一片是怎么回事？-1
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1楼 2014-11-20 15:58:46
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biotech_zhou

木虫 (著名写手)

待人以诚：专业/专注/专心

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
考虑一下电泳缓冲液的问题······
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年末优惠荧光定量pcr、WB、ELISA技术服务一律六折！交流锤炼知识，用心构筑桥梁，以更优质的产品及技术服务助力科研；QQ：2513165427；Email：b
2楼2014-11-21 15:52:06
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fanfei211923

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这是正常的，到最后应该就是一条线了
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3楼2014-11-21 16:16:51
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飘飘零

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by biotech_zhou at 2014-11-21 15:52:06
考虑一下电泳缓冲液的问题······

缓冲液都是配成母液之后，现用现稀释的
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4楼2014-11-21 22:18:59
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飘飘零

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by fanfei211923 at 2014-11-21 16:16:51
这是正常的，到最后应该就是一条线了

可是，考马斯亮蓝染胶之后，发现溴酚蓝跑模糊之后的蛋白条带也模糊啊，都不知道该怎么办了
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5楼2014-11-21 22:22:33
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wys476488620

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

环境温度多少  电压多高？ 是不是电压不稳   你配胶的试剂是不是新的 ？
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踏踏实实的就行了
6楼2014-11-23 20:44:32
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老liao

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

样品量太多或浓度太高，指示剂容易在电泳过程中弥散，只要蛋白浓度不是高得离谱，染色后的条带应该不受太大影响，建议你少加点样；
外槽电泳buffer可以多加点，免得胶内发热量过大而散不出去；

另外问一下，你们从来不用预制胶吗？
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7楼2014-11-24 13:07:27
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飘飘零

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by wys476488620 at 2014-11-23 20:44:32
环境温度多少  电压多高？ 是不是电压不稳   你配胶的试剂是不是新的 ？

正常的室温，电压在100到160V之间变动，我用的是恒流，电压会变动应该正常吧，试剂才配没多久，而且我用了别的实验室的配也胶也是这样的结果，人家跑就很漂亮，应该是蛋白处理不好的缘故。
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8楼2014-11-26 13:12:16
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飘飘零

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 老liao at 2014-11-24 13:07:27
样品量太多或浓度太高，指示剂容易在电泳过程中弥散，只要蛋白浓度不是高得离谱，染色后的条带应该不受太大影响，建议你少加点样；
外槽电泳buffer可以多加点，免得胶内发热量过大而散不出去；

另外问一下，你们 ...

我上样20微升，因为浓度很低的，20微升样品才几微克，我一直在愁蛋白丰度的问题，再加上loadding buffer很稠啊，变性之前加的buffer总感觉不太准。每次跑胶都跑不好，散热倒是还可以。
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9楼2014-11-26 13:20:30
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飘飘零

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 老liao at 2014-11-24 13:07:27
样品量太多或浓度太高，指示剂容易在电泳过程中弥散，只要蛋白浓度不是高得离谱，染色后的条带应该不受太大影响，建议你少加点样；
外槽电泳buffer可以多加点，免得胶内发热量过大而散不出去；

另外问一下，你们 ...

实验室一般能自己做的不会去买，不能自己做的才会考虑购买，还有跑完电泳后我用考马斯蓝染过胶的，发现溴酚蓝没模糊之前的蛋白条带很漂亮，模糊之后的条带就不行了，不是模糊不清就是没有，求指点啊，这些问题怎么解决
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10楼2014-11-26 13:40:57
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