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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 膜蛋白和核蛋白做western blot有什么不同
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诺曼底1227

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] 膜蛋白和核蛋白做western blot有什么不同已有3人参与

最近在做细胞表面marker的western blot，但发现按照之前常规western blot的方法似乎不行。
所以请教各位高手，做细胞表面marker的western blot方法和常规的有什么不同？最好能提供protocol，多谢
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1楼2014-03-07 04:53:45
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落英似雪

铁虫 (初入文坛)
为什么不行？
楼主把问题表述清楚一点吧。
我认为除了内参和蛋白样品准备有不同，跑胶和blot没有什么差异啊~
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好好做实验~
2楼2014-03-10 09:12:58
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yipan

铜虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
诺曼底1227: 金币+2, ★有帮助 2014-03-10 21:42:51
只用一种marker标记也就是纯粹的特异性marker应该没有，可以通过多种marker的组合标记出细胞。
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3楼2014-03-10 10:40:43
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诺曼底1227

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 落英似雪 at 2014-03-10 09:12:58
为什么不行？
楼主把问题表述清楚一点吧。
我认为除了内参和蛋白样品准备有不同，跑胶和blot没有什么差异啊~

不好意思，我没表述清楚。主要是在蛋白的提取上，多谢
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4楼2014-03-10 21:39:32
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落英似雪

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
诺曼底1227: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-03-11 21:51:19
引用回帖:
4楼: Originally posted by 诺曼底1227 at 2014-03-10 21:39:32
不好意思，我没表述清楚。主要是在蛋白的提取上，多谢...

提取总蛋白我用IP裂解液，提取膜蛋白也有专门的膜蛋白提取试剂盒，
可以用碧云天的，具体每个试剂的应用特点你可以去网页看看。
赞一下 回复此楼
好好做实验~
5楼2014-03-11 10:24:05
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
诺曼底1227: 金币+3, ★有帮助 2014-03-11 21:55:55
提取细胞核内的蛋白最好用强裂解液；提取膜蛋白最好不要用胰酶消化。
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6楼2014-03-11 11:33:39
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诺曼底1227

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 落英似雪 at 2014-03-11 10:24:05
提取总蛋白我用IP裂解液，提取膜蛋白也有专门的膜蛋白提取试剂盒，
可以用碧云天的，具体每个试剂的应用特点你可以去网页看看。...

请问一下你能不能把这个提蛋白的protocol和receipt发给我一下？多谢
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7楼2014-03-11 21:55:43
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