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jasminezhao

金虫 (小有名气)

[交流] 蛋白质印迹目的蛋白质量测定已有3人参与

最近在做western blot 的实验,做完之后用BCA法测定了蛋白质的浓度,但是怎么能够知道目的蛋白的质量啊?用什么方法进行测定?谢谢各位大侠了!!
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gaojuan1985

新虫 (正式写手)

什么叫做:“做完之后用BCA法测定了蛋白质的浓度”?不是先进行蛋白定量再做western blot吗?我们是这么做的,保证每个lane上样的蛋白量一致。至于怎么定量,用BSA作为标准品,先做个标准曲线呀。你买的BCA试剂盒里面应该有标准曲线的做法吧
2楼2013-03-04 21:22:38
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jasminezhao

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gaojuan1985 at 2013-03-04 21:22:38
什么叫做:“做完之后用BCA法测定了蛋白质的浓度”?不是先进行蛋白定量再做western blot吗?我们是这么做的,保证每个lane上样的蛋白量一致。至于怎么定量,用BSA作为标准品,先做个标准曲线呀。你买的BCA试剂盒里 ...

正常情况下是应该先做BCA ,再做WB,但是这次有点小状况就先做了WB,加样的体积是一样的,但是现在就是不知道量是多少,用法BCA法只能知道总蛋白质的量,我现在想知道的是怎么求某一蛋白质的量,例如我的目的蛋白的量。谢谢!!
3楼2013-03-05 10:08:19
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aixia5

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
用BSA不同浓度梯度做一个标准曲线,在用你的目的蛋白所测的值看在曲线中对应的浓度。BCA试剂盒里有具体的说明呢。
4楼2013-03-05 11:03:21
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gaojuan1985

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你的蛋白在总蛋白中的含量?通过凝胶成像软件的光密度分析去算一下吧
5楼2013-03-05 12:56:45
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cucu奶茶

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
那就再用同一张膜做个内参,都进行灰度扫描后,用目的条带的灰度值除上内参的灰度值的比值,进行各组比较,WB不就是相对定量吗。以后再补个好结果。
6楼2013-03-05 14:27:38
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