| 查看: 1937 | 回复: 5 | |||
[交流]
【原创】蛋白质快速测定方法步骤 已有5人参与
|
|
求助蛋白质双缩脲法测定详细步骤 [ Last edited by lovibond on 2011-9-30 at 08:50 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
淮北师范大学生物医药还有11个调剂名额和资源环境还有10调剂名额，欢迎大家赶紧调剂！
已经有0人回复
-
食物营养学 电子版
已经有0人回复
-
食品科学论文润色/翻译怎么收费?
已经有241人回复
-
电子科技大学（深圳）高等研究院陈明豪课题组招收推免硕士研究生
已经有816人回复
-
金铜纳米合成
已经有0人回复
-
求助1977版中国药典，非常感谢！！！
已经有1人回复
-
萝卜干防腐 馊酸味 微生物
已经有0人回复
-
求助bncc来源的金黄色葡萄球菌批号
已经有0人回复
-
国自然和省自然祈祷
已经有52人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 测定棉籽蛋白的蛋白质含量用哪种方法好呀？
已经有5人回复
- 【求助】蛋白质含量的测定都有哪几种方法，适用情况以及优缺点。
已经有10人回复
柳飞绵
木虫 (著名写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 贵宾: 0.068
- 金币: 3745.3
- 散金: 372
- 红花: 8
- 沙发: 7
- 帖子: 2343
- 在线: 538.8小时
- 虫号: 729358
- 注册: 2009-03-23
- 性别: GG
- 专业: 食品科学基础
shzjs2010(金币+1): 2010-07-17 09:35:52
|
一）实验原理 双缩脲（NH3CONHCONH3）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中，双缩脲与CuSO4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。 紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。测定范围为1~10mg蛋白质。干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、Tris缓冲液和某些氨基酸等。 此法的优点是较快速，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。主要的缺点是灵敏度差。因此双缩脲法常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。 （二）试剂与器材 1.试剂： （1）标准蛋白质溶液：用标准的结晶牛血清清蛋白（BSA）或标准酪蛋白，配制成10mg/ml的标准蛋白溶液，可用BSA浓度1mg/ml的A280为0.66来校正其纯度。如有需要，标准蛋白质还可预先用微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，计算出其纯度，再根据其纯度，称量配制成标准蛋白质溶液。牛血清清蛋白用H2O 或0.9%NaCl配制，酪蛋白用0．05N NaOH配制。 （2）双缩脲试剂：称以1.50克硫酸铜（CuSO4•5H2O）和6.0克酒石酸钾钠（KNaC4H4O6•4H2O），用500毫升水溶解，在搅拌下加入300毫升10% NaOH溶液，用水稀释到1升，贮存于塑料瓶中（或内壁涂以石蜡的瓶中）。此试剂可长期保存。若贮存瓶中有黑色沉淀出现，则需要重新配制。 2.器材： 可见光分光光度计、大试管15支、旋涡混合器等。 （三）操作方法 1.标准曲线的测定：取12支试管分两组，分别加入0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0毫升的标准蛋白质溶液，用水补足到1毫升，然后加入4毫升双缩脲试剂。充分摇匀后，在室温（20~25℃）下放置30分钟，于540nm处进行比色测定。用未加蛋白质溶液的第一支试管作为空白对照液。取两组测定的平均值，以蛋白质的含量为横座标，光吸收值为纵座标绘制标准曲线。 2、样品的测定：取2~3个试管，用上述同样的方法，测定未知样品的蛋白质浓度。注意样品浓度不要超过10mg/ml。 http://tong.dxy.cn/experiment/430/465/468/15904.htm |
2楼2010-07-16 16:00:44
★
柳飞绵(金币+1):多谢回帖交流 2010-07-17 09:20:33
柳飞绵(金币+1):多谢回帖交流 2010-07-17 09:20:33
|
请看标准实验指导书，如下： http://d.namipan.com/d/10bce7cd8 ... a2d454a2513007e0000 |
3楼2010-07-16 16:35:46
4楼2010-07-16 19:21:00
5楼2010-07-19 10:15:08
wy1314
木虫 (小有名气)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 4063.9
- 散金: 372
- 红花: 1
- 帖子: 287
- 在线: 191.2小时
- 虫号: 1062608
- 注册: 2010-07-22
- 性别: GG
- 专业: 天然药物化学
6楼2011-01-22 23:21:33
