| 查看: 1630 | 回复: 5 | |||
[交流]
【原创】蛋白质快速测定方法步骤 已有5人参与
|
|
求助蛋白质双缩脲法测定详细步骤 [ Last edited by lovibond on 2011-9-30 at 08:50 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
0832食品调剂推荐
已经有0人回复
-
食品调剂-总分291-有中核论文导师一作、本人二作-一志愿南昌大学学硕-介绍详细
已经有12人回复
-
食品科学论文润色/翻译怎么收费?
已经有50人回复
-
法国里尔大学_INRAE 2026招收食品方向CSC博士生
已经有0人回复
-
331求调剂，一志愿合工大食品工程（086003）
已经有2人回复
-
303分一志愿江南大学发酵工程学硕本科参加竞赛有实验室经历有酒厂质检员工作经历
已经有5人回复
-
331食品工程求调剂
已经有1人回复
-
一志愿福建农林大学 09 食品与营养 初试323
已经有0人回复
-
08600生物与医药调剂，其他方向也可以
已经有1人回复
-
钙离子的存在形式
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 测定棉籽蛋白的蛋白质含量用哪种方法好呀？
已经有5人回复
- 【求助】蛋白质含量的测定都有哪几种方法，适用情况以及优缺点。
已经有10人回复
柳飞绵
木虫 (著名写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 贵宾: 0.068
- 金币: 3745.3
- 散金: 372
- 红花: 8
- 沙发: 7
- 帖子: 2343
- 在线: 538.8小时
- 虫号: 729358
- 注册: 2009-03-23
- 性别: GG
- 专业: 食品科学基础
shzjs2010(金币+1): 2010-07-17 09:35:52
|
一）实验原理 双缩脲（NH3CONHCONH3）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中，双缩脲与CuSO4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。 紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。测定范围为1~10mg蛋白质。干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、Tris缓冲液和某些氨基酸等。 此法的优点是较快速，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。主要的缺点是灵敏度差。因此双缩脲法常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。 （二）试剂与器材 1.试剂： （1）标准蛋白质溶液：用标准的结晶牛血清清蛋白（BSA）或标准酪蛋白，配制成10mg/ml的标准蛋白溶液，可用BSA浓度1mg/ml的A280为0.66来校正其纯度。如有需要，标准蛋白质还可预先用微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，计算出其纯度，再根据其纯度，称量配制成标准蛋白质溶液。牛血清清蛋白用H2O 或0.9%NaCl配制，酪蛋白用0．05N NaOH配制。 （2）双缩脲试剂：称以1.50克硫酸铜（CuSO4•5H2O）和6.0克酒石酸钾钠（KNaC4H4O6•4H2O），用500毫升水溶解，在搅拌下加入300毫升10% NaOH溶液，用水稀释到1升，贮存于塑料瓶中（或内壁涂以石蜡的瓶中）。此试剂可长期保存。若贮存瓶中有黑色沉淀出现，则需要重新配制。 2.器材： 可见光分光光度计、大试管15支、旋涡混合器等。 （三）操作方法 1.标准曲线的测定：取12支试管分两组，分别加入0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0毫升的标准蛋白质溶液，用水补足到1毫升，然后加入4毫升双缩脲试剂。充分摇匀后，在室温（20~25℃）下放置30分钟，于540nm处进行比色测定。用未加蛋白质溶液的第一支试管作为空白对照液。取两组测定的平均值，以蛋白质的含量为横座标，光吸收值为纵座标绘制标准曲线。 2、样品的测定：取2~3个试管，用上述同样的方法，测定未知样品的蛋白质浓度。注意样品浓度不要超过10mg/ml。 http://tong.dxy.cn/experiment/430/465/468/15904.htm |
2楼2010-07-16 16:00:44
★
柳飞绵(金币+1):多谢回帖交流 2010-07-17 09:20:33
柳飞绵(金币+1):多谢回帖交流 2010-07-17 09:20:33
|
请看标准实验指导书，如下： http://d.namipan.com/d/10bce7cd8 ... a2d454a2513007e0000 |
3楼2010-07-16 16:35:46
4楼2010-07-16 19:21:00
5楼2010-07-19 10:15:08
wy1314
木虫 (小有名气)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 4063.9
- 散金: 372
- 红花: 1
- 帖子: 287
- 在线: 191.2小时
- 虫号: 1062608
- 注册: 2010-07-22
- 性别: GG
- 专业: 天然药物化学
6楼2011-01-22 23:21:33
