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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白质印迹目的蛋白质量测定
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jasminezhao

金虫 (小有名气)

[交流] 蛋白质印迹目的蛋白质量测定已有3人参与

最近在做western blot 的实验，做完之后用BCA法测定了蛋白质的浓度，但是怎么能够知道目的蛋白的质量啊？用什么方法进行测定？谢谢各位大侠了！！
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1楼2013-03-04 20:36:46
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cucu奶茶

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
那就再用同一张膜做个内参，都进行灰度扫描后，用目的条带的灰度值除上内参的灰度值的比值，进行各组比较，WB不就是相对定量吗。以后再补个好结果。
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6楼2013-03-05 14:27:38
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gaojuan1985

新虫 (正式写手)
什么叫做：“做完之后用BCA法测定了蛋白质的浓度”？不是先进行蛋白定量再做western blot吗？我们是这么做的，保证每个lane上样的蛋白量一致。至于怎么定量，用BSA作为标准品，先做个标准曲线呀。你买的BCA试剂盒里面应该有标准曲线的做法吧
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2楼2013-03-04 21:22:38
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jasminezhao

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gaojuan1985 at 2013-03-04 21:22:38
什么叫做：“做完之后用BCA法测定了蛋白质的浓度”？不是先进行蛋白定量再做western blot吗？我们是这么做的，保证每个lane上样的蛋白量一致。至于怎么定量，用BSA作为标准品，先做个标准曲线呀。你买的BCA试剂盒里 ...

正常情况下是应该先做BCA ，再做WB，但是这次有点小状况就先做了WB，加样的体积是一样的，但是现在就是不知道量是多少，用法BCA法只能知道总蛋白质的量，我现在想知道的是怎么求某一蛋白质的量，例如我的目的蛋白的量。谢谢！！
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3楼2013-03-05 10:08:19
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aixia5

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
用BSA不同浓度梯度做一个标准曲线，在用你的目的蛋白所测的值看在曲线中对应的浓度。BCA试剂盒里有具体的说明呢。
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4楼2013-03-05 11:03:21
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