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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » western-blot显完色整个泳道都亮是怎么回事
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fanwq258

木虫 (正式写手)

[求助] western-blot显完色整个泳道都亮是怎么回事

我做的是蛋白质羰基化，杂完抗体显色照相就变这样了，而且边缘效应一直没办法避免……跪求大师指点

dell 2013-01-16 12 小时 16 分钟_Exposure_117.5sec.jpg
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要么好好活，要么死，拒绝半死不活
1楼 2013-01-16 16:38:48
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

ccharlien

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
fanwq258: 金币+4, ★★★很有帮助 2013-01-17 10:07:04
可能是蛋白量太大或者抗体浓度太高或者没洗干净
也有可能是曝光的问题，用敏感度低的底物试试
而且这个117.5sec是曝光时间么？太长了，如果这么强的话曝光5秒看看
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2013-01-17 06:47:19
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porphybaby

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
fanwq258: 金币+6 2013-06-10 18:17:16
你封闭封了多长时间？

看得出是有 几个 条带的 但是 其他地方 那么多光斑 可能是 封闭没封好

又或者是 你的条带太弱了 导致背景很高 建议提取蛋白的时候尽可能浓度大一点
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9楼2013-01-18 10:41:57
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普通回帖

fanwq258

木虫 (正式写手)
求解答！！！
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要么好好活，要么死，拒绝半死不活
2楼2013-01-16 22:18:16
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fanwq258

木虫 (正式写手)
急急急！！！
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要么好好活，要么死，拒绝半死不活
4楼2013-01-17 09:42:44
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fanwq258

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ccharlien at 2013-01-17 06:47:19
可能是蛋白量太大或者抗体浓度太高或者没洗干净
也有可能是曝光的问题，用敏感度低的底物试试
而且这个117.5sec是曝光时间么？太长了，如果这么强的话曝光5秒看看

我这是在化学发光成像系统上照的，第一张是5秒的时候出来的，没这么亮，但是荧光也弥散了整条泳道……可能是浓度太大，我跑个浓度梯度试试
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要么好好活，要么死，拒绝半死不活
5楼2013-01-17 10:06:46
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飞飞050227

金虫 (小有名气)
小范同学，我也注册啦哈哈
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生命不息，实验不止！
6楼2013-01-17 10:43:15
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fanwq258

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 飞飞050227 at 2013-01-17 10:43:15
小范同学，我也注册啦哈哈

好吧，那我最后把金币给你了？
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要么好好活，要么死，拒绝半死不活
7楼2013-01-17 12:52:10
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zhang881007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是不是胶做完放了很长时间？！操作不严格，清洗上出问题了
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shine
8楼2013-01-17 19:43:33
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fanwq258

木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by zhang881007 at 2013-01-17 19:43:33
是不是胶做完放了很长时间？！操作不严格，清洗上出问题了

我一直都是跑完胶直接转膜的洗一抗是4次每次15分钟，二抗一样。
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要么好好活，要么死，拒绝半死不活
10楼2013-01-20 11:14:46
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