| 查看: 1559 | 回复: 6 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
western蛋白比预期小 已有4人参与
|
||
| 急求助！临近毕业，需要蛋白的western图，我做的是酵母展示，目的蛋白通过锚定蛋白锚定到细胞壁上，在目的蛋白下游加了flag标签，目的蛋白和锚定蛋白构成的融合蛋白的理论大小是130多kD。细胞样品SDS煮过后，跑western blot，蛋白条带大小只有70多kD。求助求助！不知道怎么解释这个现象，希望大家帮帮忙。仅有5个金币~ |
回复此楼» 猜你喜欢
323求调剂
已经有6人回复
-
一志愿北京化工大学 070300 学硕 336分 求调剂
已经有4人回复
-
352求调剂
已经有3人回复
-
一志愿东华大学化学070300，求调剂
已经有8人回复
-
277材料科学与工程080500求调剂
已经有7人回复
-
317求调剂
已经有18人回复
-
293求调剂
已经有5人回复
-
280分求调剂 一志愿085802
已经有7人回复
-
0854电子信息求调剂
已经有3人回复
-
263求调剂
已经有4人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 【求助】western blot 跑胶，蛋白跑到一半模糊一片是怎么回事？
已经有10人回复
- IP后WB，蛋白比预期的大，正反拉蛋白都做了，都是大十几kD
已经有9人回复
- 蛋白表达分析，除了western blot 还有什么方法？
已经有4人回复
- 血清蛋白western上样内参
已经有9人回复
- 做Western blot ，煮蛋白样,结果变成了黄绿色，怎么回事？
已经有6人回复
- 细胞提蛋白做western blot
已经有9人回复
- 蛋白异源表达，条带大小不对啊
已经有12人回复
- 急！500kD 蛋白western 求助
已经有17人回复
- western blot 的蛋白上样量
已经有8人回复
- western目的蛋白发生漂移
已经有7人回复
- westernblot 目标蛋白无条带
已经有9人回复
- 小分子蛋白的western blotting注意事项
已经有12人回复
- western实验中大分子量的蛋白如何鉴定
已经有5人回复
- 10kd 和100kd的蛋白同时做western blot
已经有11人回复
- 104KD的蛋白，做western blot电泳和转膜时间及膜的选择？
已经有21人回复
- 请问20多kD的蛋白做Western可不可以用湿转？另外需要注意些什么？
已经有20人回复
- 14kd的蛋白，做westernblot，电转条件是怎样的
已经有11人回复
- western 中，目的蛋白没有，但是Marker 暴出来了，什么原因啊
已经有16人回复
- 有没有人用Western blot在做17kDa蛋白质,求经验！！！
已经有22人回复
- western blot中蛋白质转印问题
已经有17人回复
- 【求助/交流】极小分子与极大分子蛋白的Western Bloting转膜求助！
已经有10人回复
shaoxin816
银虫 (正式写手)
- 应助: 12 (小学生)
- 金币: 598.8
- 散金: 2421
- 红花: 9
- 帖子: 531
- 在线: 189.4小时
- 虫号: 993171
- 注册: 2010-04-10
- 专业: 细胞周期与调控
4楼2015-05-14 21:31:44
恶魔的左眼
木虫 (正式写手)
- 应助: 110 (高中生)
- 金币: 2237.7
- 红花: 20
- 帖子: 425
- 在线: 880.6小时
- 虫号: 3705608
- 注册: 2015-03-03
- 专业: 蛋白质组学
【答案】应助回帖
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
waka19: 金币+3, ★有帮助 2015-05-14 11:33:20
感谢参与，应助指数 +1
waka19: 金币+3, ★有帮助 2015-05-14 11:33:20
|
你用的是哪家抗体？Abcam的？ 做WB时，有时候会出现的条带跟所期待的条带不一致的，原因可能是: Western blotting is a technique that separates proteins based on size - in general, the smaller the protein the faster it migrates through the gel. However, migration is also affected by other factors and so the actual band size observed may differ from that predicted. Common factors include... • post-translational modification - e.g. phosphorylation, glycosylation etc which increases the size of the protein • post-translation cleavage - e.g. many proteins are synthesized as pro-proteins, and then cleaved to give the active form, e.g. pro-caspases • splice variants - alternative splicing may create different sized proteins from the same gene • relative charge - the composition of amino acids (charged vs non-charged) • multimers - e.g. dimerisation of a protein. This is usually prevented in reducing conditions, although strong interactions can result in the appearance of higher bands |
2楼2015-05-14 09:39:08
3楼2015-05-14 11:32:26
5楼2015-05-15 16:24:36
