| 查看: 2730 | 回复: 3 | ||
1576127095新虫 (初入文坛)
|
[求助]
基因敲除中的一次同源重组问题 已有1人参与
|
一次同源重组总是重组不上，请大侠赐教一下一次同源重组的注意事项，做不出来很着急 |
回复此楼» 猜你喜欢
085600材料与化工329分求调剂
已经有5人回复
-
复试调剂
已经有18人回复
-
310求调剂
已经有16人回复
-
274求调剂
已经有7人回复
-
284求调剂
已经有8人回复
-
245求调剂
已经有7人回复
-
有爆料，一个青年教师卖房得400万，然后换了一个四青帽子
已经有11人回复
-
290求调剂
已经有15人回复
-
材料相关专业344求调剂双非工科学校或课题组
已经有16人回复
-
一志愿西交机械专硕求调剂
已经有9人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 基因敲除双交换问题
已经有15人回复
- RED重组敲除基因，PCR验证时既有目的基因条带也有打靶片段条带
已经有18人回复
- 关于二倍体酿酒酵母基因敲除的疑问
已经有15人回复
- 酵母基因敲除，同源臂长度的问题
已经有9人回复
- 酵母基因敲除，PCR验证遇到的问题。
已经有18人回复
- 求助~~~~大肠杆菌内质粒会不会自行发生同源重组？
已经有11人回复
- 基因敲除的假阳性问题
已经有15人回复
- red/et同源重组相关问题！
已经有5人回复
- 求助：本人准备做一个细菌中某个基因的敲除，想用同源重组的方法做
已经有6人回复
- 基因敲入，同源重组
已经有10人回复
- 同源重组敲除13KB大片段
已经有8人回复
- 做过用同源重组进行基因敲出的朋友请进，PCR做不出来！！
已经有16人回复
- 如何做同源重组
已经有6人回复
- 质粒上的基因敲除与染色体上的基因敲除有什么区别吗？
已经有8人回复
- 【求助/交流】细菌同源重组的同源臂最少需要多少bp呢？
已经有7人回复
- 【求助/交流】基因敲除时的同源双交换原理是什么？
已经有9人回复
- 细菌同源重组进行基因敲除的同源臂最小需要多少
已经有10人回复
RuyangHan
金虫 (小有名气)
- 应助: 82 (初中生)
- 金币: 1130.1
- 散金: 62
- 红花: 7
- 帖子: 165
- 在线: 174.8小时
- 虫号: 2725361
- 注册: 2013-10-15
- 专业: 环境微生物学
2楼2015-05-14 10:52:42
1576127095
新虫 (初入文坛)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 432.7
- 帖子: 38
- 在线: 18.5小时
- 虫号: 3321683
- 注册: 2014-07-13
- 性别: MM
- 专业: 病原细菌与放线菌生物学
3楼2015-05-14 14:32:37
RuyangHan
金虫 (小有名气)
- 应助: 82 (初中生)
- 金币: 1130.1
- 散金: 62
- 红花: 7
- 帖子: 165
- 在线: 174.8小时
- 虫号: 2725361
- 注册: 2013-10-15
- 专业: 环境微生物学
【答案】应助回帖
|
我猜你就是这个问题，你是用重组质粒转化，然后用PCR筛选吗？ 我是10个中9个假阳性，1个二次重组突变。你也可能都是假阳性，这是没办法控制的。也有可能没有检测出来，PCR检出的假阳性的条带要是很弱，就应该注意是不是背景污染，其实是真的阳性。 假如你不愿意多筛，还可以试试下面两种方法： 1. 把你的重组质粒切开成链状，这样直链DNA片段转化到菌体中，单交换是致死的，没有菌落，获得的菌落都是阳性。问题是大的质粒切开后很长，使转化效率很低。 2. 把质粒中的左右两边同源和抗性基因这一段用PCR扩增出来，大概3-4K，不太长了，用这个片段来做转化，得到的菌落也是只有突变阳性的。 |
4楼2015-05-15 08:28:54
