应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助pcr扩增扩不出目的条带
51/1返回列表
查看: 2063  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

secretov

捐助贵宾 (小有名气)

[求助] 求助pcr扩增扩不出目的条带 已有4人参与

以黄鳝某性别基因设计了三对引物，想扩这个基因全长，前两对都跑出来了，而且我有三个DNA模板样本，说明DNA模板应该没问题。但是第三对怎么也阔不出来，也试过梯度PCR了从53°到61°都试过了，没有条带，请问各位大神我还要继续试温度么，怎么继续优化条件呢？

目的片段1082bp

我是用的25微升体系：ddH2O 15 微升 、  PCRmix 8微升、 引物分别0.5 微升、 DNA1微升

PRIMER6 上下游引物Tm值分别为：54.2° 和 54.6°

程序为:
95° 5min  、  94°1min 、55°1min 、72°1min 05s、72°10min 、4° forever

谢谢帮忙，才开始做PCR很多不懂
回复此楼

» 本帖附件资源列表

  • 欢迎监督和反馈：小木虫仅提供交流平台，不对该内容负责。
    本内容由用户自主发布，如果其内容涉及到知识产权问题，其责任在于用户本人，如对版权有异议，请联系邮箱：xiaomuchong@tal.com
  • 附件 1 : 2015-04-29_CYP__DNA.tif
    • 2015-04-30 17:14:09, 874.92 K

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-04-30 17:23:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

secretov

捐助贵宾 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yingheqian at 2015-04-30 20:20:12
RT-PCR吗？如果你确定RT的产物模板没有问题，按照你说的，应该不是温度问题，重新设计引物吧

不是RT，是普通PCR。
赞一下 回复此楼
3楼2015-05-02 11:10:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

yingheqian

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
RT-PCR吗？如果你确定RT的产物模板没有问题，按照你说的，应该不是温度问题，重新设计引物吧
赞一下 回复此楼
2楼2015-04-30 20:20:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

neckey

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
优化pcr体系，参数，可能很耗时，这时候重新设计引物看看可能就能扩增出目的带。（我也是听另外一个吧友说的嘻嘻！）希望能帮你。
赞一下 回复此楼
4楼2015-05-02 11:56:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yan_nie

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2015-05-04 09:02:27
secretov: 金币+20, ★有帮助 2015-05-04 19:11:54
有可能是扩增的目标DNA区段的双链在扩增时没有完全打开（GC百分比比较高，导致目标区段DNA缠绕得较紧）。可以试一下加DMSO，用一下不同的百分比（比如2%，4%，8%）看看能不能扩增出目标条带。
赞一下(1人) 回复此楼
己欲立而立人，己欲达而达人。
5楼2015-05-04 00:09:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 3/150 2026-08-30 02:33 by ZPa0EcMwuECS
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 3/150 2026-08-30 02:22 by ZPa0EcMwuECS
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-30 01:58 by ZPa0EcMwuECS
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-30 01:36 by ZPa0EcMwuECS
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 7/350 2026-08-30 01:36 by ZPa0EcMwuECS
[考博] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 4/200 2026-08-30 01:34 by ZPa0EcMwuECS
[论文投稿] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-30 01:25 by ZPa0EcMwuECS
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 7/350 2026-08-30 01:03 by ZPa0EcMwuECS
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +4 349506619 2026-08-28 4/200 2026-08-29 22:41 by alongwaytogo
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +5 德尚中行 2026-08-27 6/300 2026-08-29 18:10 by manplx
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 基金不中，共勉 +11 eulota 2026-08-26 11/550 2026-08-28 14:22 by 火星超人xi
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[文学芳草园] 梦想 +3 myrtle 2026-08-26 3/150 2026-08-27 10:01 by angelyueyi
[基金申请] 我不理解！ +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭