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求助pcr扩增扩不出目的条带 已有4人参与
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以黄鳝某性别基因设计了三对引物，想扩这个基因全长，前两对都跑出来了，而且我有三个DNA模板样本，说明DNA模板应该没问题。但是第三对怎么也阔不出来，也试过梯度PCR了从53°到61°都试过了，没有条带，请问各位大神我还要继续试温度么，怎么继续优化条件呢？ 目的片段1082bp 我是用的25微升体系：ddH2O 15 微升 、 PCRmix 8微升、 引物分别0.5 微升、 DNA1微升 PRIMER6 上下游引物Tm值分别为：54.2° 和 54.6° 程序为: 95° 5min 、 94°1min 、55°1min 、72°1min 05s、72°10min 、4° forever 谢谢帮忙，才开始做PCR很多不懂  |
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2015-04-30 17:14:09, 874.92 K
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