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蜂鸟404铁杆木虫 (正式写手)
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[求助]
可以设计一对引物使基因的收尾相连吗，就是使这个基因环化
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如题由于试验中遇到一些麻烦不能将片段顺利连接到质粒载体上，现在我考虑把片段直接融合到质粒上，但需要线性片段环化，假如序列如下，怎么设计引物 ATTAATTTTGAAATATTAAATATTTTTGGATATATAGGTGTTAAGTTTGAAATTATTACCGCTTATGAAAATGGGAAATTAGTTGAAACGCAAATTATTGTGGATGACATAGAGTTGATAAAAGTTGAAAAATTTTTTGATTAAAGAGAAGAAGAGGGGGCGTACTACGACCCCCCTTTTAAGTGCCGAGTGCCAAATTGCTAAAAAAAGTGCCGTAAAGCTAGATACATCAAGGGTTTAGCTCATGCTACACTTCGGCGACATTTTGGCGACATTTTCGGCGACAAAAAGAAAAAAATACGATAAATGTTGCAATGTATGCACAGTTATGCTACTATGGTTTTATAAATTTTTGAGAGGTGGAACATGAAAAAAAGATTGACGATAACACTCAGTGAATCGGTGCTTGAAAATCTTGAAAAAATGGCAAAAGAGATGGGGTTGTCAAAATCTGCACTGATTTCAGTTGCCTTGGAAAACTACAAGAAAGGTCAAGTAAAATAAAAAAAAGCCGAGCTGGCAGGCGGGCTTTTAAAAGTATTATAACTTGGGTTAATTATAACTTATGGCTAAAGAAAAAGCAAGATACTTCACTTTTTTACTCTATCCTGAGTCAATCCCTAGTGATTGGGAATTGAAATTAGAATTGCTGGGCGTACCTATTGCAGTCAGCCCTTTGCATGATAGAGACAAGAGTGATGTTGAGGGACAACAATATAAAAAACCGCACTATCATGTGATTTATGTTTCAAAAAATCCAGTCACGGCAGATAGTGTGAGAATGAAAATTAAGAGGTCACTTGGAGATAATAGCGTTGCTCTAGTTCAGATAATTAGAACTAGCATTGAGAACACGTATTTATATCTTACGCATGAATCAAAGGACGCTATCGAAAAGAAAAAGCACGTCTATGATAAGGCTGACATAACTTTGCTTAGTAACTTTGATATAGACCGTTATATAACGCTTGACGTCGAAGAGAAAGACGATATGCTCAATGAGGTTTGTGACCTTATTGATGAGTATGATATTGCAAATATGCGTGAATTGAGACGTTTTATTAAACTTCATGGGGCTGAACATGGTTTACCTAGTATCAAAATTATAAATTCAGTTTTACGTTCGCATACTGGGTTAATACGTCTGTATTTTGATGCTGTCTATCAAGAACGTAAGTATGGCAGTAATATCCCTAATGTTAATCAAGAGACAGGCGAGATTTTAAGTGAGGATAGCGATGACTGATAGAAATGAGCTGATTAACGATATTGCAGAGTTGAAAGCAAAAAGAGACAGACTACTGGCTCAAATGAAAGAGGCGGAACAATGGGAAAGCGTAGCGTGGGATAGTTACTATGCAGTCGCAGACCATGTGAAAGCTCTTGAGAAAAAGCAGGAGATAGGTCGAAACTATTGGGAAAGTTCTCAAAGAGCTATTAGTCATCAATTTGACTTTGTGGCTGACCAAGCTAACAAAGTCAAAAAGGTGTTGGCTAAAAAGAGATATGATTTGCTAGATGAGGAAATCGACAAGCTGATGAACGAAGTTCGAGAGCTGGCAGATGTCCTTGGGATTGAGATTGACGAGCTCGGTTTATTGTTTTCTAAAATCTGATTACCAATTAGAATGAATATTTCCCAAATATTAAATAATAAAACAAAAAAATTGAAAAAAGTGTTTCCACCATTTTTTCAATTTTTTTATAATTTTTTTAATCTGTTATTTAAATAGTTTATAGTTAAATTTACATTTTCATTAGTCCATTCAATATTCTCTCCAAGATAACTACGAACTGCTAACAAAATTCTCTCCCTATGTTCTAATGGAGAAGATTCAGCCACTGCATTTCCCGCAATATCTTTTGGTATGATTTTACCCGTGTCCATAGTTAAAATCATACGGCATAAAGTTAATATAGAGTTGGTTTCATCATCCTGATAATTATCTATTAATTCCTCTGACGAATCCATAATGGCTCTTCTCACATCAGAAAATGGAATATCAGGTAGTAATTCCTCTAAGTCATAATTTCCGTATATTCTTTTATTTTTTCGTTTTGCTTGGTAAAGCATTATGGTTAAATCTGAATTTAATTCCTTCTGAGGAATGTATCCTTGTTCATAAAGCTCTTGTAACCATTCTCCATAAATAAATTCTTGTTTGGGAGGATGATTCCACGGTACCATTTCTTGCTGAATAATAATTGTTAATTCAATATATCGTAAGTTGCTTTTATCTCCTATTTTTTTTGAAATAGGTCTAATTTTTTGTATAAGTATTTCTTTACTTTGATCTGTCAATGGTTCAGATACGACGACTAAAAAGTCAAGATCACTATTTGGTTTTAGTCCACTCTCAACTCCTGATCCAAACATGTAAGTACCAATAAGGTTATTTTTTAAATGTTTCCGAAGTATTTTTTTCACTTTATTAATTTGTTCGTATGTATTCAAATATATCCTCCTCACTATTTTGATTAGTACCTATTTTATATCCATAGTTGTTAATTAAATAAACTTAATTTAGTTTATTTATAGATTTCATTGGCTTCTAAATTTTTTATCTAGATAATAATTATTTTAGTTAATTTTATTCTAGATTATATATGATATGATCTTTCATTTCCATAAAACTAAAGTAAGTGTAAACCTATTCATTGTTTTAAAAATATCTCTTGCCAGTCACGTTACGTTATTAGTTATAGTTATTATAACATGTATTCACGAACAGATCTCGGTGATGACGGTGAAAACCTCTGACACATGCAGCTCCCGGAGACGGTCACAGCTTGTCTGTAAGCGGATGCCGGGAGCAGACAAGCCCGTCAGGGCGCGTCAGCGGGTGTTGGCGGGTGTCGGGGCTGGCTTAACTATGCGGCATCAGAGCAGATTGTACTGAGAGTGCACCATATGCGGTGTGAAATACCGCACAGATGCGTAAGGAGAAAATACCGCATCAGGCGCCATTCGCCATTCAGGCTGCGCAACTGTTGGGAAGGGCGATCGGTGCGGGCCTCTTCGCTATTACGCCAGCTGGCGAAAGGGGGATGTGCTGCAAGGCGATTAAGTTGGGTAACGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGACGTTGTAAAACGACGGCCAGTGAATTCGAGCTCGGTACCCGGGGATCCTCTAGAGTCGACCTGCAGGCATGCAAGCTTGGCGTAATCATGGTCATAGCTGTTTCCTGTGTGAAATTGTTATCCGCTCACAATTCCACACAACATACGAGCCGGAAGCATAAAGTGTAAAGCCTGGGGTGCCTAATGAGTGAGCTAACTCACATTAATTGCGTTGCGCTCACTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCTGCATTAATGAATCGGCCAACGCGCGGGGAGAGGCGGTTTGCGTATTGGGCGCTCTTCCGCTTCCTCGCTCACTAGAAAGCCCCTAGAAGACGAAATAAGGACTTTGAATGAAGTTCTTAAGGAAAAATACGAGGAGTTAGACAAAATCGAGCTACGAGCCTCTGAGAGCCTCTCAGAGCTATCTGGTGTCGAAGGGTATATAAATAACCTAGAAAAACATTCAAGCGCCTTAGAAAGCAAAATAGGGGGCTTAGAAAACGAATATTTAAGACTGGCTAAACAAAATGCCCGATTAAGCGACTTGAAAATCATGTCTGAAAAAGAATTGGCTGAAATTCAGCCGAAAAAAGGCATGTTTGGAAAAGAACATGTCGAATTGACTAAAGAGCAATTTGAGAAATTTAAGGGATTGATATACCGAAGCAAGAATTTAGTTCATGAAAAGGAATTAGAGAATGACCAACTAAGGCGGCAAATGCCTCTGAGAAGCTCAAAAAACGGTTTTGAGGCGAGTTTGCAACGGGCTAAGGATAAAACTAAAGGAGAAAGCATAGACCGCCTTAAAAGCGAAATTAGAGGGCTTAAAAATGAAAACTCGGTTTTGAGACAGCAAAATGACAAAATGCTAGGTAAGTTAAGAGAGTTTATGCCTGATAAAGCGTTAAATAATTTTATTTCTGAACTTAAATCAATAAAACCTATCGTGAAGATAGTTAAAAGAGTTATTGAAAAAGGCTTAGGGCTCTAAGCGATTTATGCCGAGAAAACTCTTGCTAGGAAGCTATGCGAAATAGACTAGTAGGGGTCGAGTCGACAGGCTGAAAGCTTGCCGACCGAACACGACAGTCAGATTTCAGCATAGGTTTCTTCCTAGCAAGAGGAAATTGGAATAAAGAAAGCGTATCAAAGTAAAACTAAAAGGACTAAGTCCTGTGTAATACAGGCCTTAGTCCTTTACTTAAAATAGAATGTCCAACTTTTTGGGGTCAGTATATATTTTAGTCTTTTTTATTCTATAGTTGGGATAGAGATTTGTACTCCTCCTGCGCCATATGCAATTCCGCTTATACCTGCATTTCTTGCTTTTTTAGGTAAACCGAATGAACCACTAACTGATTGACCTCCTTTGCCAGATTTGCTGACAGGATATATTCTAGTAGTGTTATCTGAGAAAGTAACTGTTATCAATCCAGAATATGTATAACTTTTTGATGTATTAGGTTTAACTGACCACCAAACTTCTCGACCACCACCATATAATTCGATTTTTGTATATCCGCCATTTCCGTAACTTGTTTTGTAAGGAACTATTTCACCGGTATAAGAATAATCAGTTGTAGTTGAAATATTTGTATTTGAGGTAGTGACTGTATTATCTGCAAAAACAGTAGAAATGGATATAAATCCTAACATAGAAAAAAGAGTGACAAATACAATTATTGATTTTTTGAAACTTTTCATGAAAGTTTACCTCCGTTTTTTTGTTATAATTATAGCAAAAAAATAATTAAAAAGAAAGCGTTATCATAGAAATGAAAAAGAATTTTATTGCAATTATAAAAAACATATTAAAAAACAAAAATATCCCTAAATATTGTTTTGAAATTATTGAAAAAGATGGAAGTACTTGTTTTCTTTCGAC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