应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 镍柱纯化蛋白时，流出液及洗脱液如何处理
91/1返回列表
查看: 2727  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

毛毛虫989

铁虫 (初入文坛)

[求助] 镍柱纯化蛋白时，流出液及洗脱液如何处理 已有2人参与

是这样的，我的目的蛋白是毕赤酵母表达的蛋白，蛋白主要在上清中，分子量在25kD左右，上清中蛋白的浓度为30mg/ml左右，我直接取12ml上清上柱，但是使用SDSPAGE检测时，不知如何处理每一个咪唑浓度收集的蛋白。
问题：1、要浓缩每一个咪唑浓度收集的蛋白吗？
          2、还有什么好的办法来处理收集的洗脱液呢？
现急需，谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-04-27 11:57:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nemo88

禁虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
毛毛虫989: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-04-28 09:11:38
本帖内容被屏蔽
2楼2015-04-27 16:17:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wlt728

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
在未确定那个浓度可以洗脱目的蛋白前，每一个浓度的样品都需要跑电泳！
赞一下(1人) 回复此楼
I am not a hero , but I served with heroes！
3楼2015-04-27 22:12:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

毛毛虫989

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wlt728 at 2015-04-27 22:12:47
在未确定那个浓度可以洗脱目的蛋白前，每一个浓度的样品都需要跑电泳！

那每个浓度洗脱下来的液体，比如说10个柱体积的，要浓缩后跑电泳吗？还是有其他的办法？

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
4楼2015-04-27 22:43:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

毛毛虫989

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by nemo88 at 2015-04-27 16:17:08
额  没有紫外检测？
如果直接洗脱的应该每份洗脱液都检测，浓缩应该不必，镍柱本来就属于富集型的柱子
过柱前样品，流穿液，洗脱液都应该检测的，

麻烦问一下，如果检测的话，上SDSPAGE前洗脱的或流出的液体该如何处理呢，我是用TCA，但是梯度洗脱的话操作起来比较麻烦

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
5楼2015-04-27 22:52:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nemo88

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
6楼2015-04-27 23:23:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

毛毛虫989

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by nemo88 at 2015-04-27 23:23:04
TCA是哪种呢？沉淀富集蛋白吗？太酸肯定不适合过镍柱了，如果是富集的话，过镍柱不用富集处理的，直接过就行
处理的话，直接取样，加loading buffer煮就可以，你是怕检测不到吗？不行就做银染，有条件做western， ...

谢谢你的回答，我想再问一下你，我洗脱10个柱体积，收集的前三管，每一管是1ml的话，如何处理，我的实验室有2×的loading buffer，能说一下具体的细节吗？

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
7楼2015-04-27 23:41:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nemo88

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

毛毛虫989
8楼2015-04-28 13:41:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

毛毛虫989

铁虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by nemo88 at 2015-04-28 13:41:05
你用的什么柱子？试剂盒的还是1ml？5ml的呢？假如每管1ml的话，也就是说你只收了3ml？过亲和柱子一般还是要用柱体积来衡量。。
不过一般不用管每管多少体积，就是取20ul样品+20ul loading buffer，95~100℃5~10mi ...

谢谢

[ 发自小木虫客户端 ]
回复此楼
9楼2015-04-28 18:33:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 毛毛虫989 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 6/300 2026-11-06 09:03 by 2lRNluKrJpwL
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 9/450 2026-11-06 09:01 by 2lRNluKrJpwL
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 10/500 2026-11-06 09:01 by 2lRNluKrJpwL
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 07:55 by GBJlw5zzHWpZ
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 8/400 2026-11-06 05:33 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 10/500 2026-11-06 05:32 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 12/600 2026-11-06 05:32 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 8/400 2026-11-06 05:22 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-06 05:21 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 kvewwGtKktqB 2026-11-04 16/800 2026-11-06 05:00 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 14/700 2026-11-06 04:58 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 13/650 2026-11-06 04:49 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 04:47 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +7 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 22/1100 2026-11-06 04:47 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 8/400 2026-11-06 02:24 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 02:04 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 hNpp4Y2CGvSC 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:53 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:42 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 10/500 2026-11-06 01:40 by qL1cU46YIdK0
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭