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毛毛虫989

铁虫 (初入文坛)

[求助] 镍柱纯化蛋白时,流出液及洗脱液如何处理已有2人参与

是这样的,我的目的蛋白是毕赤酵母表达的蛋白,蛋白主要在上清中,分子量在25kD左右,上清中蛋白的浓度为30mg/ml左右,我直接取12ml上清上柱,但是使用SDSPAGE检测时,不知如何处理每一个咪唑浓度收集的蛋白。
问题:1、要浓缩每一个咪唑浓度收集的蛋白吗?
          2、还有什么好的办法来处理收集的洗脱液呢?
现急需,谢谢!
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wlt728

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
在未确定那个浓度可以洗脱目的蛋白前,每一个浓度的样品都需要跑电泳!
I am not a hero , but I served with heroes!
3楼2015-04-27 22:12:47
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nemo88

禁虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
毛毛虫989: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-04-28 09:11:38
本帖内容被屏蔽

2楼2015-04-27 16:17:08
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毛毛虫989

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by wlt728 at 2015-04-27 22:12:47
在未确定那个浓度可以洗脱目的蛋白前,每一个浓度的样品都需要跑电泳!

那每个浓度洗脱下来的液体,比如说10个柱体积的,要浓缩后跑电泳吗?还是有其他的办法?

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2015-04-27 22:43:40
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毛毛虫989

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by nemo88 at 2015-04-27 16:17:08
额  没有紫外检测?
如果直接洗脱的应该每份洗脱液都检测,浓缩应该不必,镍柱本来就属于富集型的柱子
过柱前样品,流穿液,洗脱液都应该检测的,

麻烦问一下,如果检测的话,上SDSPAGE前洗脱的或流出的液体该如何处理呢,我是用TCA,但是梯度洗脱的话操作起来比较麻烦

[ 发自小木虫客户端 ]
5楼2015-04-27 22:52:51
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