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毛毛虫989

铁虫 (初入文坛)

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[求助] 镍柱纯化蛋白时，流出液及洗脱液如何处理已有2人参与

是这样的，我的目的蛋白是毕赤酵母表达的蛋白，蛋白主要在上清中，分子量在25kD左右，上清中蛋白的浓度为30mg/ml左右，我直接取12ml上清上柱，但是使用SDSPAGE检测时，不知如何处理每一个咪唑浓度收集的蛋白。
问题：1、要浓缩每一个咪唑浓度收集的蛋白吗？
2、还有什么好的办法来处理收集的洗脱液呢？
现急需，谢谢！

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1楼2015-04-27 11:57:04

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毛毛虫989

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引用回帖:

8楼: Originally posted by nemo88 at 2015-04-28 13:41:05
你用的什么柱子？试剂盒的还是1ml？5ml的呢？假如每管1ml的话，也就是说你只收了3ml？过亲和柱子一般还是要用柱体积来衡量。。
不过一般不用管每管多少体积，就是取20ul样品+20ul loading buffer，95~100℃5~10mi ...

谢谢

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