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920081341

金虫 (小有名气)

[求助] TaqMan法荧光定量PCR曲线没有平台期是什么原因 已有2人参与

TaqMan法,荧光定量PCR曲线没有平台期只是一直上升,50个循环也试过了 ,基本没什么区别,我附了一张图请各位帮忙分析分析。

TaqMan法荧光定量PCR曲线没有平台期是什么原因
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hmyhjylrm

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
会不会模板CDNA少了啊?虽然我们检测时推荐是不超过10ng,但是我一般都用100ng的。
生物研究生
2楼2015-04-21 14:40:38
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920081341

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by hmyhjylrm at 2015-04-21 14:40:38
会不会模板CDNA少了啊?虽然我们检测时推荐是不超过10ng,但是我一般都用100ng的。

不是啊,已经用高浓度的模板试过了啊,还是这样

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2015-04-21 15:57:29
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wx26794

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

扩增荧光值很低,扩增曲线没有指数期,PCR扩增效率比较低。扩增效率低可能跟模板质量低有关,看是不是提取的模板里含有PCR抑制物,还可能是是引物设计得不好,引物的扩增效率就低,也有可能是反应体系的问题
4楼2015-06-03 17:21:16
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