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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR没有产物
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小木可

铁虫 (初入文坛)

[求助] PCR没有产物 已有2人参与

目的基因种子特异性表达,用cDNA为模板，产物检测的时候，发现有带，但是大小不对，条带特别弱。
上游引物TM：64℃
下游引物TM：50℃
PCR退火温度，之前用52℃没有产物，48℃，有大小不对的微弱条带
求大神指点下。
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1楼 2015-04-19 01:48:15
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议重新设计引物，上下游引物Tm值差异太大。不死心的话，可以试下梯度PCR。
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2楼2015-04-19 13:18:10
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小木可

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2015-04-19 13:18:10
建议重新设计引物，上下游引物Tm值差异太大。不死心的话，可以试下梯度PCR。

做了梯度PCR还是没有结果，最后还是死了心。
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3楼2015-04-26 01:19:49
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 小木可 at 2015-04-26 01:19:49
做了梯度PCR还是没有结果，最后还是死了心。...

那就重新设计引物吧。
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4楼2015-04-26 11:37:52
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yingheqian

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引物特异性不够，要特异性扩增，TM值应该高一点，最好56度以上，另外，两条引物的TM值差异过大
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5楼2015-04-26 12:46:53
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