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小木可

铁虫 (初入文坛)

[求助] PCR没有产物 已有2人参与

目的基因种子特异性表达,用cDNA为模板,产物检测的时候,发现有带,但是大小不对,条带特别弱。
上游引物TM:64℃
下游引物TM:50℃
PCR退火温度,之前用52℃没有产物,48℃,有大小不对的微弱条带
求大神指点下。
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
建议重新设计引物,上下游引物Tm值差异太大。不死心的话,可以试下梯度PCR。
2楼2015-04-19 13:18:10
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小木可

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2015-04-19 13:18:10
建议重新设计引物,上下游引物Tm值差异太大。不死心的话,可以试下梯度PCR。

做了梯度PCR还是没有结果,最后还是死了心。
3楼2015-04-26 01:19:49
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 小木可 at 2015-04-26 01:19:49
做了梯度PCR还是没有结果,最后还是死了心。...

那就重新设计引物吧。
4楼2015-04-26 11:37:52
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yingheqian

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引物特异性不够,要特异性扩增,TM值应该高一点,最好56度以上,另外,两条引物的TM值差异过大
5楼2015-04-26 12:46:53
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