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酿酒酵母

铜虫 (初入文坛)

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[求助] 酿酒酵母HO基因的敲除

各位虫友，请帮帮忙！！！！！
本人做单倍体酿酒酵母HO基因的敲除试验。设计的目的长片段引物为：HO-KO-F: AATCCATATCCTCATAAGCAGCAATCAATTCTATCTATACTTTAAACCAGCTGAAGCTTCGTACGC
HO-KO-R:
AATTTTACTTTTATTACATACAACTTTTTAAACTAATATACACATTATAGGCCACTAGTGGATCTG
其中每条引物的后20bp为扩增PUG6上的kanmx基因引物。HO-KO-F前面的40多bp与HO基因的ATG前面的序列相同。HO-KO-R前面的40多bp与HO基因的TAA后面的相同。
我pcr扩增出目的片段后转入酿酒酵母中，用G418筛选。发现板上长有菌落，但是挑单菌落培养pcr扩增HO基因，发现有条带。这是没转化成功吗？请大家帮帮忙，有什么建议能给我分享一下。先谢谢大家了。

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1楼 2015-04-13 22:00:55

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