应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 质粒PCR定点突变之后跑完的电泳图几乎看不到条带，能帮我分析下可能原因么？
汕头大学海洋科学接受调剂
71/1返回列表
查看: 3475  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

1392919714

铜虫 (小有名气)

[求助] 质粒PCR定点突变之后跑完的电泳图几乎看不到条带，能帮我分析下可能原因么？ 已有4人参与

质粒PCR定点突变之后跑完的电泳图几乎看不到条带，能帮我分析下可能原因么？还有，Marker跑的也不太分散的原因？新手上路，请多支持
质粒PCR定点突变之后跑完的电泳图几乎看不到条带，能帮我分析下可能原因么？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
边走边看
1楼 2015-04-11 09:59:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wshi85

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
1392919714: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-04-12 15:19:09
很有可能你实验失败了！你用Dpn I 直接处理，做下转化验证是否实验成功
赞一下 回复此楼
很久没在虫虫上漂游了，觉得回归虫虫！
2楼2015-04-11 23:27:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

seraphlx

新虫 (初入文坛)
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 应助指数-1, 无应助 2015-04-12 22:16:11
我最近也出现这种情况，我也是新手，不知道你解决了没，我是各种验证都不行，就是扩不出东西

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
3楼2015-04-11 23:28:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1392919714

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wshi85 at 2015-04-11 23:27:44
很有可能你实验失败了！你用Dpn I 直接处理，做下转化验证是否实验成功

终于遇到行家了，灰常感谢！
本来想做转化的，但被师姐说没有条带就说明失败了。第一次做好伤感。可能是质粒纯度不好，我用的OD260/280>1.9,打算下周重提质粒.
还有，我想问问设计的引物GC=64%，会不会是主要问题？
赞一下 回复此楼
边走边看
4楼2015-04-12 15:17:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1392919714

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by seraphlx at 2015-04-11 23:28:32
我最近也出现这种情况，我也是新手，不知道你解决了没，我是各种验证都不行，就是扩不出东西

木有啊。我就看过师姐做过一次就独立做了
赞一下 回复此楼
边走边看
5楼2015-04-12 15:18:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuhan131481

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我们突变PCR后  是不做电泳的  直接Dpn1消化后转化  挑取单克隆  送测序
赞一下 回复此楼
6楼2015-04-13 11:31:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

安群星

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

可能是PCR退火温度不合适，建议做温度梯度。同时，还可以在PCR体系中添加助剂如DMSO来提高扩增效率。一般情况下，只有要一点点的扩增产物（条带不亮没关系），用DpnI消化后直接转化，都能挑出阳性克隆。
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2016-11-28 15:38:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 1392919714 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿沪9，326求生物学调剂 +9 刘墨墨 2026-04-13 9/450 2026-04-13 18:59 by lbsjt
[考研] 368化学求调剂 +14 wwwwabcde 2026-04-07 15/750 2026-04-13 08:36 by lhj2009
[考研] 366求调剂 +9 不知名的小卅 2026-04-11 9/450 2026-04-13 01:19 by 幸免 ..
[考研] 22408 352分求调剂 +5 努力的夏末 2026-04-09 5/250 2026-04-12 19:17 by wj165256
[考研] 291求调剂 +11 关忆北. 2026-04-09 12/600 2026-04-12 10:32 by 逆水乘风
[考研] 材料与化工300求调剂 +39 肖开文 2026-04-09 43/2150 2026-04-12 01:30 by 秋豆菜芽
[考研] 299求调剂 +8 ZVVZ13 2026-04-08 8/400 2026-04-12 00:40 by 蓝云思雨
[考研] 267求调剂 +8 再忙也要吃饭啊 2026-04-09 8/400 2026-04-11 21:42 by cfdbai
[教师之家] 请问地理、遥感方面，可以做哪些横向项目啊，纵向完不成考核啊 +3 锦衣卫寒战 2026-04-07 5/250 2026-04-11 20:51 by 豫椒
[考研] 070300化学279求调剂 +19 哈哈哈^_^ 2026-04-08 20/1000 2026-04-11 20:43 by stoner78
[考研] 085410-273求调剂 +6 X1999 2026-04-10 6/300 2026-04-11 10:32 by Delta2012
[考研] 一志愿东北大学控制工程085406数二英二385，求调剂 +8 Ezra_Zhang 2026-04-09 8/400 2026-04-11 09:15 by 猪会飞
[考研] 吉大计算机技术331分，英语六级，求调剂 +3 峰峰021116 2026-04-09 3/150 2026-04-10 20:01 by chemisry
[考研] 求调剂 材料与工程 324分 专硕 +19 翩翩一书生 2026-04-10 21/1050 2026-04-10 11:41 by wp06
[考研] 367求调剂 +10 hffQAQ 2026-04-09 10/500 2026-04-09 18:06 by lijunpoly
[考研] 283电子信息求调剂 +4 三石WL 2026-04-08 4/200 2026-04-09 10:21 by wp06
[考研] 286求调剂 +19 Faune 2026-04-08 20/1000 2026-04-09 08:36 by 哦哦123
[考研] 263分B区求调剂 +6 李nihao 2026-04-08 6/300 2026-04-08 09:38 by 南开小綦
[考研] 318求调剂 +5 李青山山山 2026-04-07 5/250 2026-04-07 18:24 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿西电085401求调剂 +4 sunw1306 2026-04-07 4/200 2026-04-07 16:40 by 啵啵啵0119
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭