24小时热门版块排行榜    

查看: 3642  |  回复: 6

1392919714

铜虫 (小有名气)

[求助] 质粒PCR定点突变之后跑完的电泳图几乎看不到条带,能帮我分析下可能原因么? 已有4人参与

质粒PCR定点突变之后跑完的电泳图几乎看不到条带,能帮我分析下可能原因么?还有,Marker跑的也不太分散的原因?新手上路,请多支持
质粒PCR定点突变之后跑完的电泳图几乎看不到条带,能帮我分析下可能原因么?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

边走边看
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wshi85

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
1392919714: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-04-12 15:19:09
很有可能你实验失败了!你用Dpn I 直接处理,做下转化验证是否实验成功
很久没在虫虫上漂游了,觉得回归虫虫!
2楼2015-04-11 23:27:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

seraphlx

新虫 (初入文坛)

感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 应助指数-1, 无应助 2015-04-12 22:16:11
我最近也出现这种情况,我也是新手,不知道你解决了没,我是各种验证都不行,就是扩不出东西

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2015-04-11 23:28:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1392919714

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wshi85 at 2015-04-11 23:27:44
很有可能你实验失败了!你用Dpn I 直接处理,做下转化验证是否实验成功

终于遇到行家了,灰常感谢!
本来想做转化的,但被师姐说没有条带就说明失败了。第一次做好伤感。可能是质粒纯度不好,我用的OD260/280>1.9,打算下周重提质粒.
还有,我想问问设计的引物GC=64%,会不会是主要问题?
边走边看
4楼2015-04-12 15:17:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1392919714

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by seraphlx at 2015-04-11 23:28:32
我最近也出现这种情况,我也是新手,不知道你解决了没,我是各种验证都不行,就是扩不出东西

木有啊。我就看过师姐做过一次就独立做了
边走边看
5楼2015-04-12 15:18:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuhan131481

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我们突变PCR后  是不做电泳的  直接Dpn1消化后转化  挑取单克隆  送测序
6楼2015-04-13 11:31:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

安群星

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

可能是PCR退火温度不合适,建议做温度梯度。同时,还可以在PCR体系中添加助剂如DMSO来提高扩增效率。一般情况下,只有要一点点的扩增产物(条带不亮没关系),用DpnI消化后直接转化,都能挑出阳性克隆。
7楼2016-11-28 15:38:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 1392919714 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 4/200 2026-08-15 04:45 by 4wMiSEwB6436
[考博] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 5/250 2026-08-15 04:45 by 4wMiSEwB6436
[考研] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 7lpolszZVXgi 2026-08-14 6/300 2026-08-15 04:21 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +11 Tide man 2026-08-10 12/600 2026-08-15 02:12 by home3163
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-15 00:16 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +23 医学老男孩 2026-08-13 49/2450 2026-08-14 20:02 by zhaifei
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[论文投稿] 职称评审,求友友推荐见刊最快的期刊 +5 工厂打螺丝 2026-08-08 5/250 2026-08-14 11:03 by 玖戈弋
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +10 家与远方 2026-08-10 15/750 2026-08-14 02:08 by 绵羊哥哥
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[硕博家园] 一作与独作在应聘高校教师时区别大吗 +3 mbygzh 2026-08-08 4/200 2026-08-13 19:31 by 龙-樱
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
信息提示
请填处理意见