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dongningdz

金虫 (小有名气)

[求助] 小抽之后的质粒DNA凝胶电泳,出现两条或者三条带,为什么?

小抽之后的质粒(空载PIL3.7)DNA凝胶电泳,出现两条带或者三条带,为什么啊,能不能用来做载体???
坐等大神解决。。。。谢谢
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hippo_li

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
很正常啊,因为手提的质粒操作时可能会造成开环甚至线性化,加上原本的超螺旋,就可能出现3条带。你把提好的质粒取少量酶切一下,看看片段大小对不对就好了。
2楼2012-11-01 11:44:38
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lihongyou000

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
正常,提完的质粒有三种形式存在:超螺旋闭合环质粒,开口的闭合坏质粒,线性质粒。三者迁移速率不一样,所以会出现三条带。根据你质粒提取的好坏,出现一到三条带都属于正常。你做个酶切检测,如果酶切充分,只有两条带,目的条带和载体的条带。
3楼2012-11-01 11:58:49
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huangguoqing

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
很正常,不过一般情况都会有一条超螺旋质粒的条带亮度更高,浓度更大,可能与marker相比你的质粒会比理论的小一点,这也是很正常的。正如楼上所说,做个单酶切试试就知道了。
4楼2012-11-01 13:23:22
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