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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 重组工程菌在诱导蛋白表达的时候，加入诱导剂，蛋白表达量反而下降，是怎么回事？
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_qiye

铁虫 (初入文坛)

[求助] 重组工程菌在诱导蛋白表达的时候，加入诱导剂，蛋白表达量反而下降，是怎么回事？ 已有2人参与

各种试剂逐一验证过了，都没有什么问题，分别用乳糖、IPTG都诱导过，都比对照的时候蛋白表达少，这是什么情况呢？求各路大神指导
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既然选择了前方，便只顾风雨兼程！
1楼 2015-04-02 20:07:41
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siriusxuan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
温度太高或者诱导剂浓度太高，可以从4度到40度设置几个梯度，IPTG从0.001mM到1mM设置几个梯度，时间从2H-10H设置几个梯度。一般来说，26度 0.5mM诱导4H适用性强。
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此座可言轻社稷，江山万里起风尘。
2楼2015-04-03 13:40:32
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lomis

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
具体说一下：用的什么启动子，乳糖和IPTG浓度多少。
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没有命运，只有选择！
3楼2015-04-03 15:27:55
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tw1123581321

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by siriusxuan at 2015-04-03 13:40:32
温度太高或者诱导剂浓度太高，可以从4度到40度设置几个梯度，IPTG从0.001mM到1mM设置几个梯度，时间从2H-10H设置几个梯度。一般来说，26度 0.5mM诱导4H适用性强。

请教一下，如果想要获得最大的可溶表达，是不是只能降低温度？

发自小木虫Android客户端
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4楼2016-04-17 09:39:49
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siriusxuan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by tw1123581321 at 2016-04-17 09:39:49
请教一下，如果想要获得最大的可溶表达，是不是只能降低温度？
...

首先考虑降低温度，其次考虑降低诱导剂浓度，然后考虑选择一些促溶解性蛋白标签和促进二硫键形成的受体菌或者带有细胞周质定位的受体菌。
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此座可言轻社稷，江山万里起风尘。
5楼2016-04-17 12:15:13
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