应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 关于IPTG诱导请教各位。
汕头大学海洋科学接受调剂
71/1返回列表
查看: 4009  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

bihai0024

金虫 (小有名气)

[求助] 关于IPTG诱导请教各位。 已有4人参与

现在我们需要在发酵罐上进行IPTG诱导，有几个问题请教各位：
1.关于IPTG浓度问题，如浓度低于某一值，是不会产生诱导效应还是绝大部分的菌体没有被诱导？从原理上分析，似乎是绝大部分菌体未被诱导吧？那这样的话，IPTG的量就和诱导时的菌浓有关了。
2.大量的IPTG，如10L某一浓度的溶液，是如何添加入发酵罐呢？缓慢流加还是一次性快速加入？快速加入毒性较高，缓慢加入速度以什么为标准呢？
3.诱导时的糖饥饿问题。加入IPTG前后需要葡萄糖饥饿，那么一般是添加IPTG多少时间后加入葡萄糖呢？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

生工检测理论与实务

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-08-25 16:29:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张香玲1017

铁杆木虫 (著名写手)

冷夜雨

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助！ 2014-09-03 22:10:21
建议楼主先在摇瓶上试一下，对于IPTG浓度的大小的诱导剂的添加时间，可能不同的菌耐受力也不一样，以前我们做的是细菌的诱导，浓度大小在0.01mol/L，上罐都是一次性加入的，菌体培养时间是4小时。
赞一下 回复此楼
希望大家多多交流。
2楼2014-08-25 17:29:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

scaulmd

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
bihai0024: 金币+5 2014-08-26 09:04:56
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助！ 2014-09-03 22:10:31
看来是发酵新手，如果发酵罐分散性好，IPTG可一次性加入，如用针管直接注入，如果分散性不好，可采用补料的形式滴加，尽量快些。不需要考虑是否被诱导的问题，添加IPTG之后，最好不再流加葡萄糖，而加入浓的LB
赞一下 回复此楼
3楼2014-08-25 20:40:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bihai0024

金虫 (小有名气)
可能我没说清楚。
我想知道，当IPTG低于某一浓度，是否没有诱导效应？比如说有100个菌体，如果每个菌体需要2个IPTG进行诱导，那我加入100的IPTG，是只有50个菌体被诱导了还是全部都没有诱导？
如果只要有IPTG就有诱导效应而不是有最低浓度的话，我的发酵工艺就可以参照诱导过程的溶氧变化来指导IPTG的添加。由于IPTG的毒性，当加入后，溶氧会上升，那么理论上讲，如果在加入后一段时间，比如半个小时，开始合成目的蛋白，溶氧开始下降，此时我继续缓慢的加入IPTG，控制溶氧处于一相对固定水平，使毒性和产目的蛋白处于一个平衡，则可继续诱导尚未表达目的蛋白的菌体，当溶氧出现上升时，则说明IPTG已经达到了最适浓度。
当然，上述是纸上谈兵，由于是第一次做，比较慎重，请各位达人不吝解答。
赞一下 回复此楼
4楼2014-08-26 08:19:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

SMK_wanghu

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
心思很细腻，以前做实验，下罐时菌体浓度要高出诱导时候很多，说明至少在加入IPTG后一段时间菌体浓度还在增长。楼主想依据溶氧峰值判断最低诱导浓度！但我觉得溶氧变化可能会先随IPTG加入逐步降低再升高，溶氧谷值对应的应该是其IPTG毒性浓度，值应该很大！比较不同浓度下产量就可以了…

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
5楼2014-08-26 23:52:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hunter1984

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

心思确实很细腻，但发酵过程是否能控制的这么精确是一个很大的问题，溶氧的变化可不是只有IPTG会影响，像你说的糖饥饿也会使溶氧快速的变化，我觉得你的思路是很好的思路，要解决两个问题你才能尝试：1、找到IPTG直接关联的变化指标，就是IPTG的流加策略，2、流加方式和一次性方式加入IPTG是不是真的会让你的产物浓度差距很大，我感觉一般的产品差别应该不会太大，因为大肠杆菌本身对IPTG是有耐受性的，一个较宽的范围，并不会有明显的所谓的阀值，我们以前一次性加入OD600还是会长很多。
赞一下 回复此楼
6楼2014-09-03 09:05:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

懵千

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 张香玲1017 at 2014-08-25 17:29:55
建议楼主先在摇瓶上试一下，对于IPTG浓度的大小的诱导剂的添加时间，可能不同的菌耐受力也不一样，以前我们做的是细菌的诱导，浓度大小在0.01mol/L，上罐都是一次性加入的，菌体培养时间是4小时。

你好，我想咨询一下，培养4h是诱导之后培养4小时，然后之后再补糖嘛？

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
7楼2021-02-04 10:51:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 bihai0024 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂学校 +3 不会吃肉 2026-04-13 3/150 2026-04-13 23:13 by 木鱼.
[考研] 302求调剂 +10 易！? 2026-04-13 10/500 2026-04-13 19:04 by lbsjt
[考研] 314求调剂 +24 wakeluofu 2026-04-09 25/1250 2026-04-13 08:58 by lhj2009
[考研] 344 材料专业 求调剂211 无地域要求 +8 hualkop 2026-04-11 8/400 2026-04-12 22:24 by fqwang
[考研] 2本，初试303，0860求调剂 +6 floriea 2026-04-12 8/400 2026-04-12 18:13 by zhouxiaoyu
[考研] 339求调剂 +8 hanwudada 2026-04-11 9/450 2026-04-12 15:36 by laoshidan
[考研] 一志愿郑州大学 22408 305分求调剂 +5 安小满zzz 2026-04-08 5/250 2026-04-12 00:41 by 蓝云思雨
[考研] 280求调剂 +13 wzzz王 2026-04-09 13/650 2026-04-12 00:31 by 勇攀高峰0126
[考研] 284求调剂 +11 archer.. 2026-04-09 12/600 2026-04-11 20:23 by 蓝云思雨
[考研] 电子信息279求调剂，有书读就行 +8 wwwooden 2026-04-08 11/550 2026-04-11 20:22 by cq2548
[考研] 085501机械专硕 302分 不挑专业求调剂 +7 汪某. 2026-04-09 7/350 2026-04-11 14:37 by luhong1990
[考研] 0854调剂 +5 音像店听花鼓戏 2026-04-10 5/250 2026-04-11 10:49 by qingpingzhu
[考研] 22408 327分求调剂 +4 韵风kon 2026-04-10 4/200 2026-04-11 09:51 by 猪会飞
[考研] 266求调剂 +29 阳阳哇塞 2026-04-07 29/1450 2026-04-10 16:20 by 高维春
[考研] 293调剂 +25 yj1221 2026-04-08 26/1300 2026-04-10 15:02 by 柴小白
[考研] 机械还有还有名额吗？太难了 +6 笑笑袁 2026-04-10 6/300 2026-04-10 11:54 by 高维春
[考研] 求调剂 材料与工程 324分 专硕 +19 翩翩一书生 2026-04-10 21/1050 2026-04-10 11:41 by wp06
[考研] 招收有机化学、化工，药学，食品灯专业学生 +3 yrfhjgdj 2026-04-08 3/150 2026-04-09 10:15 by QYQX_123
[考研] 一志愿华南师范大学0702物理学305调剂 +4 念常安 2026-04-07 6/300 2026-04-08 22:53 by bljnqdcc
[考研] 275 求调剂 +8 Lei812514 2026-04-07 8/400 2026-04-08 12:46 by chemisry
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭