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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 关于IPTG诱导请教各位。
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bihai0024

金虫 (小有名气)

[求助] 关于IPTG诱导请教各位。已有4人参与

现在我们需要在发酵罐上进行IPTG诱导，有几个问题请教各位：
1.关于IPTG浓度问题，如浓度低于某一值，是不会产生诱导效应还是绝大部分的菌体没有被诱导？从原理上分析，似乎是绝大部分菌体未被诱导吧？那这样的话，IPTG的量就和诱导时的菌浓有关了。
2.大量的IPTG，如10L某一浓度的溶液，是如何添加入发酵罐呢？缓慢流加还是一次性快速加入？快速加入毒性较高，缓慢加入速度以什么为标准呢？
3.诱导时的糖饥饿问题。加入IPTG前后需要葡萄糖饥饿，那么一般是添加IPTG多少时间后加入葡萄糖呢？
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1楼2014-08-25 16:29:05
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张香玲1017

铁杆木虫 (著名写手)

冷夜雨

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助！ 2014-09-03 22:10:21
建议楼主先在摇瓶上试一下，对于IPTG浓度的大小的诱导剂的添加时间，可能不同的菌耐受力也不一样，以前我们做的是细菌的诱导，浓度大小在0.01mol/L，上罐都是一次性加入的，菌体培养时间是4小时。
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希望大家多多交流。
2楼2014-08-25 17:29:55
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scaulmd

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
bihai0024: 金币+5 2014-08-26 09:04:56
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助！ 2014-09-03 22:10:31
看来是发酵新手，如果发酵罐分散性好，IPTG可一次性加入，如用针管直接注入，如果分散性不好，可采用补料的形式滴加，尽量快些。不需要考虑是否被诱导的问题，添加IPTG之后，最好不再流加葡萄糖，而加入浓的LB
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3楼2014-08-25 20:40:09
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bihai0024

金虫 (小有名气)
可能我没说清楚。
我想知道，当IPTG低于某一浓度，是否没有诱导效应？比如说有100个菌体，如果每个菌体需要2个IPTG进行诱导，那我加入100的IPTG，是只有50个菌体被诱导了还是全部都没有诱导？
如果只要有IPTG就有诱导效应而不是有最低浓度的话，我的发酵工艺就可以参照诱导过程的溶氧变化来指导IPTG的添加。由于IPTG的毒性，当加入后，溶氧会上升，那么理论上讲，如果在加入后一段时间，比如半个小时，开始合成目的蛋白，溶氧开始下降，此时我继续缓慢的加入IPTG，控制溶氧处于一相对固定水平，使毒性和产目的蛋白处于一个平衡，则可继续诱导尚未表达目的蛋白的菌体，当溶氧出现上升时，则说明IPTG已经达到了最适浓度。
当然，上述是纸上谈兵，由于是第一次做，比较慎重，请各位达人不吝解答。
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4楼2014-08-26 08:19:39
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SMK_wanghu

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
心思很细腻，以前做实验，下罐时菌体浓度要高出诱导时候很多，说明至少在加入IPTG后一段时间菌体浓度还在增长。楼主想依据溶氧峰值判断最低诱导浓度！但我觉得溶氧变化可能会先随IPTG加入逐步降低再升高，溶氧谷值对应的应该是其IPTG毒性浓度，值应该很大！比较不同浓度下产量就可以了…

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5楼2014-08-26 23:52:20
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hunter1984

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

心思确实很细腻，但发酵过程是否能控制的这么精确是一个很大的问题，溶氧的变化可不是只有IPTG会影响，像你说的糖饥饿也会使溶氧快速的变化，我觉得你的思路是很好的思路，要解决两个问题你才能尝试：1、找到IPTG直接关联的变化指标，就是IPTG的流加策略，2、流加方式和一次性方式加入IPTG是不是真的会让你的产物浓度差距很大，我感觉一般的产品差别应该不会太大，因为大肠杆菌本身对IPTG是有耐受性的，一个较宽的范围，并不会有明显的所谓的阀值，我们以前一次性加入OD600还是会长很多。
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6楼2014-09-03 09:05:58
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懵千

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 张香玲1017 at 2014-08-25 17:29:55
建议楼主先在摇瓶上试一下，对于IPTG浓度的大小的诱导剂的添加时间，可能不同的菌耐受力也不一样，以前我们做的是细菌的诱导，浓度大小在0.01mol/L，上罐都是一次性加入的，菌体培养时间是4小时。

你好，我想咨询一下，培养4h是诱导之后培养4小时，然后之后再补糖嘛？

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7楼2021-02-04 10:51:40
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