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关于IPTG诱导请教各位。 已有4人参与
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现在我们需要在发酵罐上进行IPTG诱导，有几个问题请教各位： 1.关于IPTG浓度问题，如浓度低于某一值，是不会产生诱导效应还是绝大部分的菌体没有被诱导？从原理上分析，似乎是绝大部分菌体未被诱导吧？那这样的话，IPTG的量就和诱导时的菌浓有关了。 2.大量的IPTG，如10L某一浓度的溶液，是如何添加入发酵罐呢？缓慢流加还是一次性快速加入？快速加入毒性较高，缓慢加入速度以什么为标准呢？ 3.诱导时的糖饥饿问题。加入IPTG前后需要葡萄糖饥饿，那么一般是添加IPTG多少时间后加入葡萄糖呢？ |
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5楼2014-08-26 23:52:20
张香玲1017
铁杆木虫 (著名写手)
冷夜雨
- 应助: 148 (高中生)
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- 注册: 2010-03-06
- 性别: MM
- 专业: 微生物生理与生物化学
2楼2014-08-25 17:29:55
3楼2014-08-25 20:40:09
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可能我没说清楚。 我想知道，当IPTG低于某一浓度，是否没有诱导效应？比如说有100个菌体，如果每个菌体需要2个IPTG进行诱导，那我加入100的IPTG，是只有50个菌体被诱导了还是全部都没有诱导？ 如果只要有IPTG就有诱导效应而不是有最低浓度的话，我的发酵工艺就可以参照诱导过程的溶氧变化来指导IPTG的添加。由于IPTG的毒性，当加入后，溶氧会上升，那么理论上讲，如果在加入后一段时间，比如半个小时，开始合成目的蛋白，溶氧开始下降，此时我继续缓慢的加入IPTG，控制溶氧处于一相对固定水平，使毒性和产目的蛋白处于一个平衡，则可继续诱导尚未表达目的蛋白的菌体，当溶氧出现上升时，则说明IPTG已经达到了最适浓度。 当然，上述是纸上谈兵，由于是第一次做，比较慎重，请各位达人不吝解答。 |
4楼2014-08-26 08:19:39
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