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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】大家有用到过什么过表达的载体吗？需要诱导剂诱导吗？
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天使托

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T.Shen

[交流] 【求助/交流】大家有用到过什么过表达的载体吗？需要诱导剂诱导吗？ 已有4人参与

最近在做几个基因的过表达，可是就是没有任何反应，载体和基因没有任何问题，连接也没有问题，方向什么都考虑了，可是为什么转到菌里面就是没有反应呢？

载体为PAK1900

不知道大家在用过表达的载体做互补或者过表达时需要加诱导剂吗？是不是需要诱导才可以进行表达啊？

求教求教啊！
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
1楼 2011-03-19 22:16:57
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
楼主转到大肠杆菌吗？我们常用的是pet28a，PMAL,PGEX-4T-1，感觉还可以的！
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jiayoubashaonian
2楼2011-03-19 22:21:40
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天使托

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T.Shen
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Originally posted by blackrose8089 at 2011-03-19 22:21:40:
楼主转到大肠杆菌吗？我们常用的是pet28a，PMAL,PGEX-4T-1，感觉还可以的！

是转到我们的宿主菌里面，绿脓杆菌，你用的过量表达的载体需要诱导剂诱导吗？
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3楼2011-03-19 22:54:16
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blackrose8089

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Originally posted by 天使托 at 2011-03-19 22:54:16:
是转到我们的宿主菌里面，绿脓杆菌，你用的过量表达的载体需要诱导剂诱导吗？

是的，用IPTG,0.4mM就可以的，先试一下30度，100rpm，如果没戏，就换下载体和和感受态试一下！
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jiayoubashaonian
4楼2011-03-19 22:58:57
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天使托

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T.Shen
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Originally posted by blackrose8089 at 2011-03-19 22:58:57:
是的，用IPTG,0.4mM就可以的，先试一下30度，100rpm，如果没戏，就换下载体和和感受态试一下！

30度？100rpm什么意思？
因为没有诱导过，所以请您细说一下，谢谢！
如果不用诱导的话可以进行过量表达吗？
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5楼2011-03-20 12:29:37
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天使托

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T.Shen
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Originally posted by blackrose8089 at 2011-03-19 22:58:57:
是的，用IPTG,0.4mM就可以的，先试一下30度，100rpm，如果没戏，就换下载体和和感受态试一下！

你的意思是IPTG浓度是0.4mm 加入到菌液中，然后在30度下，100rpm的转速摇菌，然后就可以让过量表达的载体在宿主菌中表达，是这样子吗？
谢谢！
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6楼2011-03-20 13:44:20
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blackrose8089

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Originally posted by 天使托 at 2011-03-20 13:44:20:
你的意思是IPTG浓度是0.4mm 加入到菌液中，然后在30度下，100rpm的转速摇菌，然后就可以让过量表达的载体在宿主菌中表达，是这样子吗？
谢谢！

是的，我们表达蛋白是这样的，37度有时也可以的！
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jiayoubashaonian
7楼2011-03-20 15:04:42
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天使托

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T.Shen
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Originally posted by blackrose8089 at 2011-03-20 15:04:42:
是的，我们表达蛋白是这样的，37度有时也可以的！

我不是表达蛋白，我是想让目的基因在宿主菌（野生型）中过量表达，从而对部分抗生素产生抗性，现在我没有进行诱导，转到宿主菌中和野生型相比并没有对抗生素产生抗性，我怀疑是不是过量表达的载体没有在宿主菌中行使正常的功能，所以我问一下过量表达的载体是否需要诱导才可以进行过表达？
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8楼2011-03-20 16:09:04
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
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过量表达载体受到IPTG诱导会表达蛋白，建议楼主查阅一下IPTG诱导原理看一下，或许会有帮助！
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jiayoubashaonian
9楼2011-03-20 19:57:29
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天使托

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T.Shen
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Originally posted by blackrose8089 at 2011-03-20 19:57:29:
过量表达载体受到IPTG诱导会表达蛋白，建议楼主查阅一下IPTG诱导原理看一下，或许会有帮助！

谢谢，原理我已经看过。诱导的话确实可以使其过量表达蛋白，但是一般咱过量表达基因也是为了使其的过量表达产物即蛋白多一些，这样才能行使其下游的工作啊
！我试试看！

我查阅了一些文献，里面IPTG的浓度是1mM,不知道是不是有些太大了?
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10楼2011-03-20 21:13:04
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