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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

[交流] 【求助/交流】大家有用到过什么过表达的载体吗?需要诱导剂诱导吗? 已有4人参与

最近在做几个基因的过表达,可是就是没有任何反应,载体和基因没有任何问题,连接也没有问题,方向什么都考虑了,可是为什么转到菌里面就是没有反应呢?

载体为PAK1900

不知道大家在用过表达的载体做互补或者过表达时需要加诱导剂吗?是不是需要诱导才可以进行表达啊?

求教求教啊!
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-03-20 13:44:20:
你的意思是IPTG浓度是0.4mm 加入到菌液中,然后在30度下,100rpm的转速摇菌,然后就可以让过量表达的载体在宿主菌中表达,是这样子吗?
谢谢!

是的,我们表达蛋白是这样的,37度有时也可以的!
jiayoubashaonian
7楼2011-03-20 15:04:42
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

楼主转到大肠杆菌吗?我们常用的是pet28a,PMAL,PGEX-4T-1,感觉还可以的!
jiayoubashaonian
2楼2011-03-19 22:21:40
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

引用回帖:
Originally posted by blackrose8089 at 2011-03-19 22:21:40:
楼主转到大肠杆菌吗?我们常用的是pet28a,PMAL,PGEX-4T-1,感觉还可以的!

是转到我们的宿主菌里面,绿脓杆菌,你用的过量表达的载体需要诱导剂诱导吗?
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3楼2011-03-19 22:54:16
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-03-19 22:54:16:
是转到我们的宿主菌里面,绿脓杆菌,你用的过量表达的载体需要诱导剂诱导吗?

是的,用IPTG,0.4mM就可以的,先试一下30度,100rpm,如果没戏,就换下载体和和感受态试一下!
jiayoubashaonian
4楼2011-03-19 22:58:57
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