24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1757  |  回复: 15

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

[交流] 【求助/交流】大家有用到过什么过表达的载体吗?需要诱导剂诱导吗? 已有4人参与

最近在做几个基因的过表达,可是就是没有任何反应,载体和基因没有任何问题,连接也没有问题,方向什么都考虑了,可是为什么转到菌里面就是没有反应呢?

载体为PAK1900

不知道大家在用过表达的载体做互补或者过表达时需要加诱导剂吗?是不是需要诱导才可以进行表达啊?

求教求教啊!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

楼主转到大肠杆菌吗?我们常用的是pet28a,PMAL,PGEX-4T-1,感觉还可以的!
jiayoubashaonian
2楼2011-03-19 22:21:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

引用回帖:
Originally posted by blackrose8089 at 2011-03-19 22:21:40:
楼主转到大肠杆菌吗?我们常用的是pet28a,PMAL,PGEX-4T-1,感觉还可以的!

是转到我们的宿主菌里面,绿脓杆菌,你用的过量表达的载体需要诱导剂诱导吗?
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2011-03-19 22:54:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-03-19 22:54:16:
是转到我们的宿主菌里面,绿脓杆菌,你用的过量表达的载体需要诱导剂诱导吗?

是的,用IPTG,0.4mM就可以的,先试一下30度,100rpm,如果没戏,就换下载体和和感受态试一下!
jiayoubashaonian
4楼2011-03-19 22:58:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

引用回帖:
Originally posted by blackrose8089 at 2011-03-19 22:58:57:
是的,用IPTG,0.4mM就可以的,先试一下30度,100rpm,如果没戏,就换下载体和和感受态试一下!

30度?100rpm什么意思?
因为没有诱导过,所以请您细说一下,谢谢!
如果不用诱导的话可以进行过量表达吗?
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
5楼2011-03-20 12:29:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

引用回帖:
Originally posted by blackrose8089 at 2011-03-19 22:58:57:
是的,用IPTG,0.4mM就可以的,先试一下30度,100rpm,如果没戏,就换下载体和和感受态试一下!

你的意思是IPTG浓度是0.4mm 加入到菌液中,然后在30度下,100rpm的转速摇菌,然后就可以让过量表达的载体在宿主菌中表达,是这样子吗?
谢谢!
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
6楼2011-03-20 13:44:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-03-20 13:44:20:
你的意思是IPTG浓度是0.4mm 加入到菌液中,然后在30度下,100rpm的转速摇菌,然后就可以让过量表达的载体在宿主菌中表达,是这样子吗?
谢谢!

是的,我们表达蛋白是这样的,37度有时也可以的!
jiayoubashaonian
7楼2011-03-20 15:04:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

引用回帖:
Originally posted by blackrose8089 at 2011-03-20 15:04:42:
是的,我们表达蛋白是这样的,37度有时也可以的!

我不是表达蛋白,我是想让目的基因在宿主菌(野生型)中过量表达,从而对部分抗生素产生抗性,现在我没有进行诱导,转到宿主菌中和野生型相比并没有对抗生素产生抗性,我怀疑是不是过量表达的载体没有在宿主菌中行使正常的功能,所以我问一下过量表达的载体是否需要诱导才可以进行过表达?
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
8楼2011-03-20 16:09:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
过量表达载体受到IPTG诱导会表达蛋白,建议楼主查阅一下IPTG诱导原理看一下,或许会有帮助!
jiayoubashaonian
9楼2011-03-20 19:57:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

引用回帖:
Originally posted by blackrose8089 at 2011-03-20 19:57:29:
过量表达载体受到IPTG诱导会表达蛋白,建议楼主查阅一下IPTG诱导原理看一下,或许会有帮助!

谢谢,原理我已经看过。诱导的话确实可以使其过量表达蛋白,但是一般咱过量表达基因也是为了使其的过量表达产物即蛋白多一些,这样才能行使其下游的工作啊
!我试试看!

我查阅了一些文献,里面IPTG的浓度是1mM,不知道是不是有些太大了?
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
10楼2011-03-20 21:13:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 天使托 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料工程专硕求调剂 +5 hyl3153942 2026-03-29 5/250 2026-03-30 10:50 by 晴空210210
[考研] 348求调剂 +6 小懒虫不懒了 2026-03-28 6/300 2026-03-30 10:29 by Evan_Liu
[考研] 一志愿武汉理工,总分321,英一数二,求老师收留。 +11 nnnnnnn5 2026-03-25 11/550 2026-03-29 20:42 by 无际的草原
[考研] 环境工程 085701,267求调剂 +6 minht 2026-03-29 6/300 2026-03-29 16:21 by 学员8dgXkO
[考研] 070305高分子化学与物理 304分求调剂 +12 c297914 2026-03-28 12/600 2026-03-29 16:21 by Serene1974
[考研] 一志愿:西北大学,英一数一408-284分求调剂 +4 12.27 2026-03-27 4/200 2026-03-29 14:40 by zhshch
[考研] 070300化学354求调剂 +6 101次希望 2026-03-28 6/300 2026-03-29 12:57 by 无际的草原
[考研] 求调剂一志愿武汉理工大学材料工程(085601) +7 WW.' 2026-03-23 9/450 2026-03-29 12:42 by fmesaito
[考研] 083000学硕274求调剂 +8 Li李鱼 2026-03-26 8/400 2026-03-28 20:33 by 加油向未来啊
[有机交流] 高温高压反应求助 10+4 chibby 2026-03-25 4/200 2026-03-27 21:08 by BT20230424
[考研] 求调剂 +4 零八# 2026-03-27 4/200 2026-03-27 18:07 by yu221
[考研] 322求调剂 +4 我真的很想学习 2026-03-23 4/200 2026-03-27 13:51 by 杨杨杨紫
[考研] 359求调剂 +4 王了个楠 2026-03-25 4/200 2026-03-27 08:43 by 不吃魚的貓
[考研] 342求调剂 +3 加油a李zs 2026-03-26 3/150 2026-03-27 00:29 by wxiongid
[考研] 打过很多竞赛,085406控制工程300分,求调剂 +3 askeladz 2026-03-26 3/150 2026-03-26 09:08 by 给你你注意休息
[考研] 334分 一志愿武理-080500 材料求调剂 +4 李李不服输 2026-03-25 4/200 2026-03-25 21:26 by 星空星月
[考研] 318求调剂 +3 plum李子 2026-03-23 3/150 2026-03-25 09:42 by 雾散后相遇lc
[考研] 340求调剂 +5 话梅糖111 2026-03-24 5/250 2026-03-25 06:53 by ilovexiaobin
[有机交流] 有机合成求助 20+3 FENGSHUJEI 2026-03-23 5/250 2026-03-24 19:31 by 88817753
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境,总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-23 8/400 2026-03-23 20:36 by Creta
信息提示
请填处理意见