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莉莉儿baby

新虫 (初入文坛)

[求助] 构建质粒问题 已有1人参与

质粒构建最后一步总是不能长菌,不知道问题出在哪一步了,很惆怅,酶切之后用slice回收,是回收试剂盒有问题吗,因为其他实验步骤和实验室的同学都一样,只有回收用的试剂盒不一样
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董博士

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
质粒转化总是长不出克隆有很多原因的,可能是感受态的原因,也可能是培养基的原因,或者就是没有连接成功等,建议:双酶切产物回收后,跑个凝胶电泳看一下片段是否回收成功,连接时间适当延长,转化时带个阳性质粒对照(排除感受态和培养基的问题)。
另外,推荐您看一下我之前分享的一个资源帖“DNA重组-载体构建常见问题及解决方法”,都是我个人的经验总结,可能会给您一些帮助。
医学&统计学
2楼2015-04-02 11:23:47
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