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莉莉儿baby

新虫 (初入文坛)

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[求助] 构建质粒问题已有1人参与

质粒构建最后一步总是不能长菌，不知道问题出在哪一步了，很惆怅，酶切之后用slice回收，是回收试剂盒有问题吗，因为其他实验步骤和实验室的同学都一样，只有回收用的试剂盒不一样

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1楼 2015-04-02 08:47:05

已阅关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

董博士

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

质粒转化总是长不出克隆有很多原因的，可能是感受态的原因，也可能是培养基的原因，或者就是没有连接成功等，建议：双酶切产物回收后，跑个凝胶电泳看一下片段是否回收成功，连接时间适当延长，转化时带个阳性质粒对照（排除感受态和培养基的问题）。
另外，推荐您看一下我之前分享的一个资源帖“DNA重组-载体构建常见问题及解决方法”，都是我个人的经验总结，可能会给您一些帮助。

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