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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 跑胶跑不出来
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tramyhao

新虫 (初入文坛)

[求助] 跑胶跑不出来 已有8人参与

大侠们好 我是微生物方面的新手，空气微生物，用的是QIAGEN试剂盒提取的DNA，下面是我跑的琼脂糖凝胶电泳
依次是MARKER 阳性对照 阴性对照  接着是样品   引物是27f 1492r
体系（20） 物质        量（μL）
ddH2O        14.2
primer1    0.5
primer2        0.5
10×buffer with KCL        2
Taq 酶        0.3
dNTP        0.5
模板                2
求高手指导  做不出毕业有问题啊

跑胶跑不出来
gt 2015-03-31.jpg
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1楼 2015-04-01 16:59:10
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

河大虫虫

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by tramyhao at 2015-04-01 17:47:50
我太水了 模板不进行PCR 直接拿去电泳吗？ 我不知哎...

看看你的DNA有没有提出来
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9楼2015-04-01 22:02:59
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普通回帖

781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-04-01 22:39:18
dNTP   加1.5UL.  
模板    加5UL
模板 可以跑下电泳，看看有没有
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采菊东篱下，悠然见南山。
2楼2015-04-01 17:05:02
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

★ ★
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-04-01 22:39:38
没有条带，确定你的引物设计的合理性，接着考虑模板是否降解了，Taq DNA聚合酶的选用也是一方面，http://www.detaibio.com/dna-taq-polymerase.html
扩增不出来，还是多方面考虑的好，也可以适当对条件进行一些摸索，祝成功
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
3楼2015-04-01 17:05:56
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tramyhao

新虫 (初入文坛)
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4楼2015-04-01 17:41:42
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tramyhao

新虫 (初入文坛)
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5楼2015-04-01 17:47:50
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781055707

木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by tramyhao at 2015-04-01 17:41:42
可是我的是20微升体系啊...

配成25的，可以。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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采菊东篱下，悠然见南山。
6楼2015-04-01 17:58:10
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781055707

木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by tramyhao at 2015-04-01 17:47:50
我太水了 模板不进行PCR 直接拿去电泳吗？ 我不知哎...

DNA也是会有条带的。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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采菊东篱下，悠然见南山。
7楼2015-04-01 17:59:13
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浩远天涯

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-04-01 22:40:01
阳性对照都没有条带，说明pcr体系或程序有问题呀，楼主考虑一下退火温度的问题，退火温度太低或太高都有可能P不出条带，楼主和导师探讨一下比较好，导师经验最丰富了。
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8楼2015-04-01 21:36:59
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ccandcc

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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一个一个排查

一个是是否提出来dna了用紫外看
一个是pcr是否出来东西了----至于pcr怎么排查好找吧。

好的一点，你的电泳胶做的挺好，不过marker没跑开 ，时间不够当然啥都没出来你就停了这正常
不过你相机的焦点没对好，照片发虚，这不应该。
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10楼2015-04-02 08:25:22
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