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sweet561

银虫 (小有名气)

[求助] 跑蛋白胶时样品不能被压成一条线，而呈弥散状，求原因

目前，在用pPIC9K表达胰岛素的基因，但发现在跑SDS电泳时，样品不能被压成一条线，而是很宽很弥散，所以最终蛋白都无法确定，也换了Loading，还是不行，不知道是什么原因造成的，希望高手们能帮忙解答，谢谢！
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1楼 2013-10-20 09:36:51
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bolysu

禁虫 (著名写手)
★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待更详细的解答 2013-10-20 12:11:27
本帖内容被屏蔽
2楼2013-10-20 10:18:56
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wlt728

铁杆木虫 (著名写手)
最好上图，才能确定
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I am not a hero , but I served with heroes！
3楼2013-10-20 14:34:53
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雨梦无声

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-10-20 18:21:57
胶配方选择不足够好或者电泳不停电泳或者重复多次点样或者样没经前处理，或者没有或者
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4楼2013-10-20 15:49:12
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
跑胶上marker了吗？marker的前沿是否正常？
配胶缓冲液pH不对，浓缩胶不够长，样品中含有较多的盐或者离子浓度过高。
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5楼2013-10-21 00:36:45
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yujitianqing

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
胶可能还没干，最好是下层倒胶1个小时候再加上层胶；上层胶的buffer加错也会出现这种情况。还有缓冲液也要常换，最好不超过5次。
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6楼2013-10-21 11:14:57
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kumaxi

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
先看一下你的Mark 的条带是不是正常的，那就应该是你的制样有问题的，样品的盐浓度是不是太高了，样品是不是没有煮到位，如果mark都不正常，那就要考虑你的体系有没有问题，电极缓冲液的pH要一次到位，不能要HCl什么的调，否则条带扩散，SDS的量是不是对的，丙烯酰胺和甲叉丙烯酰胺有没有过期（胶凝了也跑不出好条带），以及你的过硫酸铵有没有过期，大概就考虑这些吧
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不怕千万人阻挡.就怕自己投降!
7楼2013-10-21 17:10:28
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sweet561

银虫 (小有名气)
谢谢各位的回答，我的蛋白比较小，只有6,3KD，所以我查了一下，发现是不是SDS-PAGE不适合太小分子量的蛋白，换用Tricine-SDS-PAGE会不会好点呢，有用过Tricine-SDS-PAGE的吗？
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8楼2013-10-21 17:24:27
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